[发明专利]一种覆盆子多酚指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种覆盆子多酚指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤是：

1）成分提取：0.5克覆盆子待测样品液氮速冷并使用匀浆机粉碎，加入5毫升70%甲醇水溶液，摇匀后超声在60摄氏度下处理50分种，离心后上清经0.45μm微孔滤膜过滤，即得待测样品提取液；

2）步骤1得到的待测样品提取液用超高效液相色谱分析，采用ACQUITY UPLC HSS T3柱，孔径：1.8 μm, 直径×长：2.1 × 150 mm，进样体积5微升进行分离，得到UPLC分离色谱图；

测定待测样品提取液分离充分面积大于600的成分峰,测试条件：进样体积5μL，流速为0.3mL/min，柱温为50℃；检测波长为360nm；流动相A 为0.1%甲酸-水；流动相B为0.1%甲酸-乙腈，线性梯度为0min：5%流动相B；5min：10%流动相B；25min：25%流动相B；37min：95%流动相B；

3）UPLC偶联一级质谱为AB TripleTOF 5600plus System，二级质谱为IDAauto-MS2，用于获取UPLC分离的待测样品提取液中各成分及其碎片离子的质荷比；

4）根据步骤3）获取的待测样品提取液的成分及其碎片离子的质荷比数据推断基团组成，进行数据库比对和标准品验证，确定各成分的物质；确定的10种多酚化合物成分包括鞣花酸戊糖苷、肉桂糖苷、鞣花酸、芦丁、异槲皮素、山奈酚-3-O-芸香糖苷异构体、山奈酚己糖、山奈酚-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、椴树苷；

5) 多酚指纹图谱建立

对于多个不同来源的待测样品进行步骤1）、步骤2），

比较不同来源待测样品的UPLC分离色谱图中的主要峰，确定8个含量较高且保留时间相对稳定的共有峰作为指纹图谱特征峰，包括鞣花酸戊糖苷、肉桂糖苷、鞣花酸、山奈酚-3-O-芸香糖苷异构体、山奈酚己糖、山奈酚-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、椴树苷，

误差控制在0.01%-0.05%；一级质谱的质谱条件为：MS 阴离子模式，源电压源是-4.5kV,源温度550℃，气体1为空气，和天然气2均设置为50 psi, 气帘气为氮气，压力设置为35psi，最大允许误差设置为±5 ppm，减光电位为100v;碰撞能10v；

对于MS/MS采集模式，碰撞能量设置为40±20 V，离子释放量设置为67，离子释放宽度设置为25；

二级质谱的质谱条件为：

以IDA为基础的auto-MS2对响应最强的8个代谢物离子进行全扫描，前体离子和产物离子的m/z扫描范围分别设定为100 - 2000 Da和50 - 2000 Da，质量校准在每次分析之前自动执行，使用自动校准传送系统。

2.如权利要求1所述的建立方法，其特征在于，

所述的多酚指纹图谱的应用：指纹图谱特征峰成分对应的含量作为指纹参数用于计算Mahalanobis距离，Mahalanobis距离和典型判别分析(Canonical discriminantanalysis) 采用SAS 9.1的CANDISC程序运算的，最终用Ward的方法进行聚类，在系统聚类分析的模块下构建系统树 ，此系统树可用于后续的伪品鉴定以及材料来源的分析。