[发明专利]一种还原氧化石墨烯丝素蛋白复合膜制备方法

权利要求书

1.一种还原氧化石墨烯丝素蛋白复合膜制备方法，其特征在于：包括如下步骤:

S1:将桑蚕茧剪碎，称取5g桑蚕茧，然后将其置于2L浓度为0.02 mol/L Na₂CO₃溶液中煮沸30min，去除蚕丝表面丝胶蛋白，煮沸结束后用去离子水清洗脱胶丝素蛋白数次，并自然晾干:

S2:将S1制备的丝素蛋白在60℃下溶解于9M LiBr约4h，待丝素蛋白完全溶解后，用透析膜透析72h，得到质量体积分数为6-7 w/v%的丝素蛋白水溶液，将所述丝素蛋白水溶液存放在-20℃冰箱中冷冻处理:

S3:将S2制备的6-7 w/v% 丝素蛋白冷冻固体冷冻干燥处理，得到丝素蛋白固体粉末:

S4:将S3制备的丝素蛋白固体粉末加入六氟异丙醇(HFIP)溶剂中，过夜放置直至完全溶解，得到12.5 mg/mL 丝素蛋白HFIP溶液:

S5:将GO水溶液按照一定质量比(GO/丝素蛋白 wt%)加入S4制备的丝素蛋白HFIP溶液中，迅速搅拌均匀，GO质量分数为0.01~1 wt%:

S6:取24孔细胞培养板，每孔加入60μLS5制备的丝素蛋白/GO溶液，放置于通风橱内过夜自然干燥，待膜层干燥后，向孔板内加入 90%甲醇溶液2mL/孔，诱使丝素蛋白结构发生β-折叠结构转变，孔板至于通风橱内过夜自然晾干:

S7:次日，将孔板置于41 mmol/L 抗坏血酸溶液中，在95℃条件下加热5min得到丝素蛋白/rGO膜层:

S8:还原后，分别用去离子水、70%乙醇溶液清洗膜层3次，然后将样品转移至超净台内，用0.22μm孔径滤膜过滤后的70%乙醇溶液清洗3次，无菌PBS清洗3次，以待接种细胞使用。