[发明专利]一种乳酸菌快速计数方法

说明书

本发明公开了一种乳酸菌快速计数方法，包括步骤：S1，对待检样品以设定稀释梯度F进行稀释处理；S2，吸取稀释后的待检样品涂抹在载玻片上的设定区域M，用结晶紫染色液染色，水洗，再用革兰氏碘液染色，再水洗，用乙醇脱色，再水洗，加沙黄染色液或番红染色液进行复染，干燥后上显微镜镜检；S3，在载玻片设定区域M内镜检多个不同的视野，并记录每个视野的紫色活菌数，求出每个视野的平均活菌数n等；本发明可直接数出乳杆菌和链球菌的数量，将检测时间缩短至1小时，解决了国标方法耗时较长的缺点，同时使用的试剂较少，为企业节约成本。

技术领域

本发明涉及乳酸菌计数领域，更为具体的，涉及一种乳酸菌快速计数方法。

背景技术

现有技术中，例如公开号为CN101659982A的中国专利申请公开了一种乳酸菌活菌总数快速计数方法，包括步骤：取次甲基蓝0.1-1g，碳酸钠0.5-2g，蒸馏水100ml，混匀，静置0.5-2h后，过滤，静置2h；称取1克菌粉或移取1ml乳酸菌培养液，用无菌水进行10-100倍稀释，制成菌悬液；移取菌悬液，用无菌水进行10倍梯度稀释；吸取5μl菌悬液置于载玻片上，加5μl上述染液，盖上盖玻片；选择10～20个视野计算乳酸菌活菌总数，并乳酸活菌数平均值；计算每克菌粉/每毫升菌液中含有的乳酸活菌数为上述公式，其中，C为盖玻片的面积，B为一个视野的面积，A为每个视野中乳酸活菌数平均值等。该专利申请方案采用次甲基蓝和碳酸钠配成的染色液1:1染色，由于乳酸菌是革兰氏阳性菌，在观察对紫色菌进行计数时，可能会存在误把阴性菌也作为乳酸菌进行计数的问题，影响计数的准确性。

现有国家标准GB 4789.35-2016乳酸菌检验对乳酸菌的计数需要时间72h±2h左右，这是因为一个乳酸菌吸收营养、增殖，最终达到肉眼可见的菌落进行计数需要较长时间。并且，乳杆菌为厌氧菌，嗜热链球菌为兼性厌氧菌，二者培养条件不同，故只能分开检测，耗费人力和培养基。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种乳酸菌快速计数方法，可直接数出乳杆菌和链球菌的数量，将检测时间缩短至1小时，解决了国标方法耗时较长的缺点，同时使用的试剂较少，为企业节约成本等。

本发明的目的是通过以下方案实现的：

一种乳酸菌快速计数方法，包括步骤：

S1，对待检样品以设定稀释梯度F进行稀释处理；

S2，吸取稀释后的待检样品涂抹在载玻片上的设定区域M，用结晶紫染色液染色，水洗，再用革兰氏碘液染色，再水洗，用乙醇脱色，再水洗，加沙黄染色液或番红染色液进行复染，干燥后上显微镜镜检；

S3，在载玻片设定区域M内镜检多个不同的视野，并记录每个视野的紫色活菌数，求出每个视野的平均活菌数n。

进一步地，包括步骤：

S4，采用测微仪测出物镜的面积s1，设定区域M面积/s1＝N，计算出载玻片设定区域M内有多少个物镜大小N。

进一步地，包括步骤：

S5，计算设定区域M内活乳酸菌总数q＝N×n。

进一步地，包括步骤：

S6，计算待检样品稀释前的活乳酸菌总数Q＝q×F。

进一步地，所述稀释梯度F在10⁴～10⁶之间。

进一步地，用结晶紫染色液染色1～2mins。

进一步地，再用革兰氏碘液染色1min。

进一步地，用乙醇脱色20～30s。

进一步地，复染1～2mins。

进一步地，在载玻片设定区域M内镜检10个不同的视野。