[发明专利]适用于桑黄生长发育研究的内参基因及其内参引物的筛选方法

权利要求书

1.适用于桑黄生长发育研究的内参基因，其特征在于：包括SIP内参基因和RSMG内参基因，所述SIP内参基因的核酸序列为No.2，所述RSMG内参基因的核酸序列为No.4。

2.如权利要求1所述的适用于桑黄生长发育研究的内参基因，其特征在于：所述SIP内参基因和RSMG内参基因的正向引物和反向引物的核苷酸序列如下所示：

SIP-F：TCATGCGTCAGGTTGGAGAC；

SIP -R：TCAATGCCAGCATCTCCGTT；

RSMG-F：AGTTCCTCATTCAGGCGAGC；

RSMG-R：ACCTGTCGCTTGCTCTCTTC。

3.适用于桑黄生长发育研究的内参基因的内参引物的筛选方法，其特征在于包括如下步骤：

a)内参基因的选择：将桑黄的菌丝体、幼嫩子实体和成熟子实体分别进行转录组测序，筛选出FPKM值＞100且在桑黄三个发育时期表达量无显著性差异的基因作为候选内参基因，以传统内参基因β-Actin作为对照，所述β-Actin内参基因的核酸序列为No.1，候选内参基因分别为SIP内参基因、AH内参基因、RSMG内参基因和TRT内参基因，其中，SIP内参基因的核酸序列为No.2，AH内参基因的核酸序列为No.3，RSMG内参基因的核酸序列为No.4，TRT内参基因的核酸序列为No.5；

b)实时荧光定量PCR：在候选内参基因和传统内参基因的特异区段设计内参引物，利用桑黄的三个发育时期样本的cDNA作为模板进行实时荧光定量PCR；

c)内参引物的选择：对实时荧光定量PCR数据进行综合分析，筛选出稳定性好的内参引物。

4.如权利要求3所述的适用于桑黄生长发育研究的内参基因的内参引物的筛选方法，其特征在于：所述步骤b)中，采用Primer-BLAST在线网站设计候选内参基因和传统内参基因的正向引物和反向引物，候选内参基因和传统内参基因的正向引物和反向引物的核苷酸序列如下所示：

β-Actin-F：TCTGGTCGTACCACCGGTAT；

β-Actin-R：AAGTCCGTCAAGTCACGACC；

SIP-F：TCATGCGTCAGGTTGGAGAC；

SIP -R：TCAATGCCAGCATCTCCGTT；

AH-F：TAGAGGACGATGGACCCGTT；

AH-R：TTTCGACAATCCGACCCGAG；

RSMG-F：AGTTCCTCATTCAGGCGAGC；

RSMG-R：ACCTGTCGCTTGCTCTCTTC；

TRT-F：CAGATGTCTACGCCCTCGTC；

TRT-R：CCGGATCGATGCAAGATGGA。

5.如权利要求3所述的适用于桑黄生长发育研究的内参基因的内参引物的筛选方法，其特征在于：所述步骤c)中，通过geNorm、NormFinder和BestKeeper三种软件对实时荧光定量PCR数据进行分析。