[发明专利]缺刻缘绿藻磷脂酶A2的基因序列及其编码蛋白和应用

说明书

本发明属于基因工程领域，公开了缺刻缘绿藻磷脂酶A2的基因序列及其编码蛋白和应用。缺刻缘绿藻磷脂酶A2(MiPLA2)的基因序列如SEQ ID NO:3所示，可用于绿藻油脂合成调控，通过特异性地断裂甘油磷脂中甘油碳骨架sn‑2位的酯键，将磷脂酰胆碱水解为溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸，经游离脂肪酸生产富含花生四烯酸的三酰甘油。本发明通过构建MiPLA2所编码蛋白的原核表达载体pET32a‑MiPLA2，将其转化至大肠杆菌中诱导表达和纯化获得重组蛋白MiPLA2，经检测MiPLA2能将磷脂酰胆碱水解成溶血磷脂酰胆碱，从而鉴定MiPLA2的基因功能。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及缺刻缘绿藻磷脂酶A2(MiPLA2)的基因序列及其编码蛋白和应用。

背景技术

磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2)是一种水解酶(EC 3.1.1.4)，它在酰基编辑(acyl editing)的Lands循环过程中，特异性地断裂甘油磷脂中甘油碳骨架sn-2位的酯键，从而将膜脂中甘油碳骨架sn-2位上经过去饱和等修饰作用的酰基释放到“酰基池(acylpool)”；这些经过修饰的脂肪酸(如多不饱和脂肪酸)再经过Kennedy等途径被合成为三酰甘油(triacylglycerol，TAG)，使TAG富含这些修饰过的酰基。在缺刻缘绿藻(Myrmeciaincisa)TAG生物合成的前期研究中发现，该藻TAG中花生四烯酸(arachidonicacid，ArA)(一种多不饱和脂肪酸)的含量占TAG总脂肪酸的68.02％(欧阳珑玲等，2016)，预示PLA2在富含ArA的TAG合成过程中发挥着重要作用。

现有技术中，专利号为ZL201810595704.6的中国专利公开了缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶(MiDGAT2C)，申请号为201810338650.5的专利申请公开了缺刻缘绿藻溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAAT)，申请号为202010098613.9的专利申请公开了缺刻缘绿藻CDP-乙醇胺:二酰甘油乙醇胺磷酸转移酶(MiEPT)，但缺刻缘绿藻磷脂酶A2(MiPLA2)目前未见报道。

发明内容

本发明的第一目的是，提供一种分离的DNA。

本发明的第二目的是，提供一种DNA的应用。

本发明的第三目的是，提供一种蛋白。

本发明的第四目的是，提供一种蛋白的应用。

本发明的第五目的是，提供一种重组表达载体。

本发明的第六目的是，提供一种重组表达载体的应用。

本发明的第七目的是，提供一种分离的cDNA。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种分离的DNA，所述的DNA为：a)如SEQ ID NO:3所述的多核苷酸；或b)与a)所述的核苷酸序列互补的多核苷酸。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的DNA在绿藻油脂合成调控中的应用，通过特异性地断裂甘油磷脂中甘油碳骨架sn-2位的酯键，将磷脂酰胆碱(PC)水解成溶血磷脂酰胆碱(LPC)和游离脂肪酸，且经游离脂肪酸生产富含花生四烯酸的三酰甘油。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：上述DNA编码的蛋白。

为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：上述DNA编码的蛋白在绿藻油脂合成调控中的应用。

进一步地，上述DNA编码的蛋白通过特异性地断裂甘油磷脂中甘油碳骨架sn-2位的酯键，将磷脂酰胆碱(PC)水解成溶血磷脂酰胆碱(LPC)和游离脂肪酸，且经游离脂肪酸生产富含花生四烯酸的三酰甘油。

为实现上述第五个目的，本发明采取的技术方案是：一种重组表达载体，所述重组表达载体包含上述DNA，且由其与质粒或病毒构建得到；在优选的实施方案中，所述的质粒为pMD19T质粒。