[发明专利]一种血清miRNA乳腺癌诊断标志物组合及其检测试剂盒

说明书

乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，最新的统计数据显示，在全世界女性恶性肿瘤中，发病率具第一位，死亡率居第二位。乳腺癌的早期诊断可以显著提高患者的生存期。本发明涉及一种血清miRNA乳腺癌诊断标志物组合及其检测试剂盒，由人血清中的hsa‑miR‑1292‑5p,hsa‑miR‑887‑5p,hsa‑miR‑4658，hsa‑miR‑6783‑3p，hsa‑miR‑3156‑5p和hsa‑miR‑5581‑3p中的1种或多种组成，内参基因为U6，并提供了上述miRNA及U6的特异性引物。还提供了阳性质控品、阴性质控品、poly‑A加尾酶、逆转录酶等试剂盒检测必须的试剂及达到检测目的所需的技术解决方案。本发明可以更早期的检测出血清中一些瘤源性miRNA的异常升高，用于临床早期乳腺癌辅助诊断。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体的涉及一种乳腺癌miRNA标志物的联合检测试剂盒。

背景技术

乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，目前在全世界的发病率和死亡率都高居其它恶性肿瘤之首。全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势，美国8名妇女一生中就会有1人患乳腺癌。中国虽不是乳腺癌的高发国家，但不宜乐观，近年我国乳腺癌发病率的增长速度却高出高发国家1～2个百分点。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据显示：全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位。由于早期乳腺癌患者的症状不明显，大多数病人确诊时已处于中晚期阶段，因此在乳腺癌的预防和治疗中，提高乳腺癌的早期诊断起着至关重要的作用。目前乳腺癌的早期诊断主要依赖影像技术和肿瘤标志物的检测。低剂量计算机断层扫描(LDCT)具有较高的灵敏度，是最常见的乳腺癌筛查和诊断手段。但CT假阳性较高、检测费用高，并且辐射对人体还有潜在的伤害。血清肿瘤标志物的检测因其安全无害，费用低且简单可行，在早期乳腺癌的筛查和诊断中具有重要的作用。

微小RNA(m1RNA)是一类高度保守、内源性、非编码的单链小分子RNA，其长度约为19~25nt，主要参与基因转录和转录后水平的调控，可调节不同的生物学过程，如细胞增殖、分化、凋亡、劲附和死亡等，与癌症的形成和演变密切相关。miRNA会因为细胞的死亡或者细胞主动分泌进入到血液循环中，miRNAs在血液中是非常稳定的，与mRNAs相比不太容易发生核酸酶降解。比如，在室温下孵育血浆样品长达24小时，对循环miRNAs水平的影响较小,此外，即使经过多次冻融循环，miRNAs在血浆样品中仍保持相对稳定。另外miRNAs很容易定量，并在不同的病理生理条件下存在差异表达。大量研究表明，miRNAs检测更早期、更方便、更准确、实现无创诊断。所以，miRNA可以有效用于乳腺癌的早期诊断。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种血清miRNA乳腺癌诊断标志物组合及其检测试剂盒，可以简单有效且无创的对乳腺癌进行检测。

为实现本发明的目的，整体技术方案如下：

提供了一种血清miRNA乳腺癌诊断标志物组合，由人血清中的hsa-miR-1292-5p ,hsa-miR-887-5p ,hsa-miR-4658，hsa-miR-6783-3p，hsa-miR-3156-5p和hsa-miR-5581-3p中的1种或多种组成。

上述的miRNA标志物组合在乳腺癌诊断中的应用。

上述的miRNA标志物组合在制备检测试剂盒中的应用。

进一步的，使用上述的miRNA标志物组合检测试剂盒中的引物和试剂，进行反转录及qPCR扩增。

本发明所涉及的hsa-miR-1292-5p，hsa-miR-887-5p，hsa-miR-4658，hsa-miR-6783-3p，hsa-miR-3156-5p和hsa-miR-5581-3p中的每种miRNA的序列是已知公开的。

表1 上述miRNA序列及U6的公共数据库信息