[发明专利]基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒及方法

说明书

一种基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒及方法，是用MNPs为载体及前体物，偶联目标物AFB1核酸适配体与Cy5标记的cDNA杂交形成的双链DNA，得到荧光淬灭的基底检测探针，然后在96聚苯乙烯微孔板上，以MNPs为前体物在盐酸消解下与K₄Fe(CN)₆反应得到原位生长的PBNPs。PBNPs在808 nm激光照射下能使基底溶液温度升高，实现热信号检测；同时可催化无色TMB在H₂O₂的存在下氧化形成蓝色产物，实现比色信号检测；最后，PBNPs原位生长过程中，MNPs被酸刻蚀脱落含有荧光基团的DNA双链，实现荧光信号检测。本方法灵敏度高，操作简单，快速便携，准确性高，能应于被污染食品中AFB1的检测。

技术领域

本发明属于新型功能材料与生物传感检测技术领域，具体涉及一种基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒及检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），主要存在于土壤、动植物和坚果中，其中，最容易被AFB1污染的食品有花生、玉米、核桃和水稻。AFB1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，它对人和动物均具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏有严重的损害，因此它是引起食品安全事故的重要因素。由于极低的AFB1就能引发较为显著的生理毒性，因此对其检测需要高灵敏度、高选择性和高准确性的方法。

目前，检测AFB1的方法主要有高效液相色谱法、液相色谱/质谱联用法、免疫层析法和传统的酶联免疫分析法。高效液相色谱法和液相色谱/质谱联用法虽然有较高的检测准确度，但其仪器成本高，需要专业的操作人员，不适用于现场快速分析检测；免疫层析法虽有简单、快速和成本低的优点，但是其灵敏度和精密度较差；传统的酶联免疫分析法具有操作过程繁琐、成本高、检测周期长、易出现假阳性等缺点。因此，通过改良的酶联免疫方法实现对污染食品中AFB1含量简单、灵敏和准确的测定变得越来越重要。

发明内容

本发明的目的之一在于，克服现有技术的缺陷，提供一种基于PBNPs（普鲁士蓝纳米颗粒（Prussian blue nanoparticles），简写为PBNPs）原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒，实现AFB1便携可视的现场即时半定量及荧光准确定量检测。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒，该试剂盒包括AFB1单克隆抗体（Ab1）、生物素标记的AFB1核酸适配体（bio-aptamer）、Cy5标记的cDNA和链霉亲和素化的MNPs（SA-MNPs）；该链霉亲和素化的MNPs偶联生物素标记的AFB1核酸适配体与Cy5标记的cDNA杂交形成的双链DNA后得到检测探针。

上述试剂盒还包括96孔聚苯乙烯微孔板、PBS缓冲液及显色底物。

具体地，上述试剂盒包括如下试剂：

（1）96孔聚苯乙烯微孔板；

（2）AFB1单克隆抗体（Ab1），市购产品；

（3）生物素标记的AFB1核酸适配体（bio-aptamer）：浓度为1μM，其核苷酸序列为：5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCC-3’，如SEQ ID No:1所示；

（4）Cy5标记的cDNA：浓度为1μM，序列为：5’- GGCCTAGCG-3’，如SEQ ID No:2所示；

（5）链霉亲和素化的MNPs（SA-MNPs，MNPs为四氧化三铁磁纳米颗粒）：浓度为0.1-1mg/mL，市购产品；