[发明专利]一种提高结核感染T细胞试验敏感性的试剂盒

说明书

本发明涉及一种提高结核感染T细胞试验敏感性的试剂盒，其包括标准T‑SPOT.TB试验材料和α‑PD‑L1抗体；标准T‑SPOT.TB试验材料包含：包被有IFN‑γ抗体的微孔板、结核特异性抗原早期分泌靶向抗原、培养滤过蛋白抗原、阳性质控溶液、阴性对照细胞培养液、浓缩生物素标记的二抗试剂、底物显色液。本发明使用PD‑L1抗体（a‑PD‑L1）阻断PD‑1/PD‑L1通路,避免结核病患者PBMCs中的LDGs（低密度中性粒细胞）通过PD‑1/PD‑L1信号通路抑制T细胞分泌IFN‑γ而影响T‑SPOT.TB的敏感性，借此提高T‑SPOT的敏感性和结核感染T细胞试验的准确性。

技术领域

本发明涉及结核感染的早期筛查技术领域，尤其是一种提高结核感染T细胞试验敏感性的试剂盒。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病。世卫组织报道，2018年新发结核病例为1000万人，但这只是冰山一角；还有感染人数巨大的潜伏感染人群，约为17亿人。这部分潜伏感染人群没有临床症状，CT扫描显示正常，没有抗体应答，导致结核分枝杆菌存在却难以诊断。而活动性结核病例均来自于潜伏感染人群，潜伏感染人群在免疫力低下，比如合并基础疾病如糖尿病、风湿病、恶性肿瘤、艾滋病等或者大量使用激素的情况下，可能转变为活动性结核。

结核感染T细胞斑点试验T-SPOT.TB是一种新型免疫检测技术。其原理是结核病患者体内存在特异的效应T细胞，效应T细胞再次受到结核特异性抗原早期分泌靶向抗原(ESAT-6)和培养滤过蛋白(CFP-10)刺激时会产生γ干扰素(IFN-γ)。T-SPOT.TB则是通过体外检测IFN-γ诊断结核病及潜伏结核感染，有助于潜伏结核感染的早期筛查。但实践中发现，T-SPOT.TB试验检测结果特异性虽然达到100%，但灵敏度有待进一步提高，尤其是对潜伏结核感染的早期筛查，存在一定的干扰因素降低了试验的敏感性。

发明内容

（一）要解决的技术问题

鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种提高结核感染T细胞试验敏感性的试剂盒，通过阻断PD-1/PD-L1通路，减少或避免结核病中LDGs对T细胞分泌IFN-γ的抑制作用，提高T-SPOT.TB的敏感性，提高潜伏结核感染的早期筛查准确性和灵敏性。

（二）技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

第一方面，本发明实施例提供一种提高结核感染T细胞试验敏感性的T-SPOT.TB试验试剂盒，其特征在于，其包括标准T-SPOT.TB试验材料和α-PD-L1抗体；所述标准T-SPOT.TB试验材料包含：包被有IFN- γ抗体的微孔板、结核特异性抗原早期分泌靶向抗原、培养滤过蛋白抗原、阳性质控溶液、阴性对照细胞培养液、浓缩生物素标记的二抗试剂、底物显色液。

上述试剂盒的应用原理是：在进行T-SPOT.TB试验操作之前，取抗凝静脉血，分离PBMCs，使用α-PD-L1抗体处理该PBMCs借以阻断PD-1/PD-L1通路，将经α-PD-L1抗体处理的PBMCs作为试验检测材料，进行后续T-SPOT.TB试验操作。使用α-PD-L1抗体阻断PD-1/PD-L1通路，可以减少或避免结核病中LDGs对T细胞分泌IFN-γ的抑制作用，提高T-SPOT.TB的敏感性，提高潜伏结核感染的早期筛查准确性和灵敏性。

优选地，还包括：淋巴细胞分离液、AIM-V培养液，以及Hanks液、RPMI1640培养液或PBS液中的至少一种。

上述试剂主要是在从抗凝静脉血分离PBMCs过程中使用，具体地，从抗凝静脉血分离PBMCs的方法为：

S11:取抗凝静脉血，与Hanks液按体积比1:0.9~1.2混匀，使抗凝静脉血被稀释；

S12:在离心管内盛有淋巴分离液，将稀释的抗凝静脉血沿离心管管壁缓慢加至淋巴细胞分离液上层，切勿冲破淋巴细胞分离液液面；