[发明专利]用于检测甜瓜疫病抗性的CAPS标记及其应用

权利要求书

1.检测与甜瓜抗疫病基因紧密连锁的CAPS标记的试剂在甜瓜抗疫病育种中的应用，所述CAPS标记位于甜瓜基因组3.5.1版本12号染色体第22,902,391bp的位置，表现为G/C多态性，所述CAPS标记以以下引物扩增获得：

上游引物序列：5’-TATGTAACTGCTATCTCCCTAA-3’；

下游引物序列：5’-GGTTACTGGAGCTTTGGCTC-3’；

将扩增产物以Fau I酶切判断多态性，酶切后形成一条220bp的条带和一条55bp的条带的为抗病材料，仅有275bp条带的为感病材料；

所述疫病指辣椒疫霉菌引起的，以叶、茎、果实处暗绿色、或黄褐色斑点为特征的甜瓜病害。

2.检测与甜瓜抗疫病基因紧密连锁的CAPS标记的试剂在与甜瓜抗疫病性状相关的甜瓜品种鉴定中的应用，所述CAPS标记以以下引物扩增获得：

上游引物序列：5’-TATGTAACTGCTATCTCCCTAA-3’；

下游引物序列：5’-GGTTACTGGAGCTTTGGCTC-3’；

将扩增产物以Fau I酶切判断多态性，酶切后形成一条220bp的条带和一条55bp的条带的为抗病材料，仅有275bp条带的为感病材料；

所述疫病指辣椒疫霉菌引起的，以叶、茎、果实处暗绿色、或黄褐色斑点为特征的甜瓜病害。

3. 根据权利要求1或2任一项所述的应用，其中PCR扩增体系为10μl，包括1μl DNA工作液，1μl 10×Buffer缓冲液，0.4μl dNTPs，0.2μl DNA聚合酶，上、下游引物各0.2μl，用7μlddH₂O将总体积补齐至10μl；

扩增程序为：94℃预变性4min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸8min；

酶切体系为：0.5μl限制性内切酶Fau I，1μl 10×CutSmart Buffer缓冲液，4μl PCR产物，4.5μl ddH₂O将总体积补齐至10μl，55℃酶切4h，65℃灭活20min；

酶切后将酶切产物用7％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察。

4.一种甜瓜育种/品种鉴定用试剂盒，包括权利要求1所述的引物，

以及Fau I酶；

所述甜瓜育种为采用权利要求1所述的CAPS标记进行的甜瓜抗疫病育种；

所述品种鉴定为采用权利要求1所述的CAPS标记进行的与甜瓜抗疫病性状相关的甜瓜品种鉴定；所述疫病指辣椒疫霉菌引起的，以叶、茎、果实处暗绿色、或黄褐色斑点为特征的甜瓜病害。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其还包含PCR和酶切试剂。