[发明专利]一种β-1,4-半乳糖基转移酶-IsiRNA在克服肝癌化疗耐药药物中的应用

说明书

本发明公开了一种β‑1,4‑半乳糖基转移酶‑I siRNA在克服肝癌化疗耐药药物中的应用，用阿霉素处理肝癌细胞Huh‑7和HepG2，通过PCR检测β‑1,4‑半乳糖基转移酶‑I糖基化和基因表达水平变化；倒置显微镜观察发现阿霉素诱导肝癌细胞形态变化；检测β‑1,4‑半乳糖基转移酶‑I，MDRI表达：β‑1,4‑半乳糖基转移酶‑I的特异性siRNA构建和转染；观察β‑1,4‑半乳糖基转移酶‑I对EMT相关分子的影响；划痕实验检测β‑1,4‑半乳糖基转移酶‑I对肝癌细胞迁移能力的影响：阿霉素诱导的肝癌细胞huh‑7、hepG2，观察细胞迁移能力，观察β‑1,4‑半乳糖基转移酶‑I对肝癌细胞侵袭能力的影响。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种β-1,4-半乳糖基转移酶-IsiRNA在克服肝癌化疗耐药药物中的应用。

背景技术

原发性肝癌是全世界范围内常见的威胁人类生命的疾病之一，是全球第五大高发和第三致死性的恶性肿瘤，每年增加超过56万新发病例并引起超过50万例病人死亡。目前肝癌的治疗方案包括手术切除、肝脏移植、射频消融、肝动脉化疗栓塞和索拉菲尼。尽管手术是治疗肝癌的首选，然而，绝大多数肝癌患者都是在中晚期发现，而此时肿瘤已不能被手术切除而被迫采取姑息治疗。需要注意的是，虽然化疗在很多其他类型肿瘤病人中都得到非常广泛的应用，对于肝癌病人却没有明显的效果。由于肝癌具有内在的化疗药物抵抗的特性，导致肝癌患者的化疗药物的用量往往很大。因此，不管是全身性的化疗或者局部动脉内给药，往往对患者产生较大的毒副作用，却不能有效的抑制肿瘤生长和延长病人的生存期。

EMT概念的首次提出源于首次提出源于 1982 年学者在三维胶原凝胶中培养的晶状体上皮细胞出现间质细胞样形态。作为一个动态变化的过程， EMT表现为上皮细胞失去分化特征，细胞与细胞间的紧密连接以及细胞极性消失，并获得间质细胞特性，包括迁移性增加、 侵袭性增加，耐受凋亡能力的增加。在多种细胞外刺激以及转录因子的调控作用下，E-钙黏连蛋白等细胞粘附分子的表达下调， 同时波形蛋白等间质细胞表型分子的表达上调，最终导致 EMT 的发生。一系列的研究表明，EMT的发生在促进上皮源性肿瘤细胞间质表型发生的同时，细胞对化疗药物的敏感性也发生显著的变化。在多种耐药细胞株的构建过程中， 均发现细胞形态发生间质性的改变。2006 年Yang等发现对奥沙利铂耐药的结直肠细胞形态发生改变，出现极性丧失、细胞间连接消失以及伪足出现的改变， E-钙黏连蛋白以及波形蛋白等上皮与间质细胞标志物的表达改变。2009 年Rho等发现，耐吉非替尼的肿瘤细胞在对药物敏感性降低的同时，细胞的侵袭性能以及运动能力明显增加。2009 年Black等学者在细胞水平干预 E-钙黏连蛋白表达后，细胞对西妥昔单抗的敏感性明显降低。上述研究结果表明某些上皮源性的肿瘤在经历 EMT过程中，细胞形态、表面标志物以及运动侵袭能力发生改变，使细胞对化疗药物的敏感性亦产生显著的改变。EMT与肿瘤细胞对化疗药物的敏感性以及耐药现象的发生是密切相关的。但目前肿瘤特别是普遍对化疗耐药的肝癌其内在耐药的分子机制尚不清楚。