[发明专利]呼吸道合胞病毒全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列、重组腺病毒载体及其应用产品

说明书

本发明提供了一种呼吸道合胞病毒全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列、重组腺病毒载体及其应用产品。该全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列包括S155C、S190F、V207L和S290C四个突变位点，保留了融合糖蛋白的跨膜区及胞内区，其序列表如序列1所示。还提供了一种含有全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列的猩猩复制缺陷型重组腺病毒载体pChAd63或人复制缺陷型重组腺病毒载体pAd26，腺病毒载体出发毒株为猩猩腺病毒63型或人腺病毒26型，缺失了腺病毒E1和E3区、且E4orf6替换为人5型腺病毒E4orf6。以及应用重组腺病毒的产品。本发明的重组腺病毒载体免疫动物后，能在短时间内诱导机体产生强烈的细胞免疫和体液免疫反应，产生的抗体对融合前F识别能力较强，具有较好的免疫效果和免疫保护作用。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种呼吸道合胞病毒全长融合前融合糖蛋白核苷酸序列、重组腺病毒载体及其应用产品。

背景技术

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus，RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要病毒病原，同时也是引起免疫缺陷患者和老年人等高危人群住院治疗及死亡的重要病毒病原。从婴幼儿感染情况看，1岁时有70％的婴幼儿感染过RSV，2岁时已全部感染过至少1次。从儿童感染RSV后的死亡情况看，在1月至1岁的儿童死亡原因中，RSV感染引起的死亡人数约占总数的6.7％，紧随疟疾位列第二位，5岁以下儿童因下呼吸道感染引起死亡的病因中，RSV感染引起的死亡人数约占总数的6.29％，紧随肺炎球菌排列第二位，在病毒病原中位列第一位。在我国，RSV是引起儿童流行性喘憋性肺炎(简称流喘肺炎)及儿童期应变性哮喘的主要病原，26.5％的婴幼儿急性呼吸道感染是由于RSV感染引起[5]。全球每年约有3310万5岁以下儿童感染RSV，其中约有320万感染儿童需要住院治疗，5.96万住院儿童死亡，这其中，99％的死亡发生在发展中国家，给世界各国尤其是发展中国家带来沉重的经济和社会负担。

RSV属肺病毒科、正肺病毒属，单股负链RNA包膜病毒[7]，病毒粒子直径为150-300nm，共编码11种蛋白，其中融合糖蛋白(Fusion glycoprotein，F)和黏附糖蛋白(Attachment glycoprotein，G)为主要中和抗原[8]，根据G蛋白抗原性存在的差异，RSV分为A和B两个亚型。F蛋白的抗原性较稳定，针对F蛋白的中和抗体对A、B两个亚型的RSV感染具有交叉保护作用，可减少高危人群对RSV感染的严重程度，在RSV流行季节，针对F蛋白的单克隆抗体(Palivizumab,帕利珠单抗)已用于对高危人群的预防，提示诱导产生足够高的针对RSV F蛋白的中和抗体的疫苗可以预防RSV感染。因此，F蛋白成为RSV疫苗研究的主要目标抗原。