[发明专利]新型冠状病毒及其培养方法，以及新型冠状病毒灭活疫苗

说明书

本发明涉及疫苗领域，具体而言，涉及新型冠状病毒及其培养方法，以及新型冠状病毒灭活疫苗。该新型冠状病毒，其于2020年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:V202039，毒株名称为2019‑nCoV/K‑T13。本发明提供了一种新型冠状病毒的毒株，该毒株的培养效价高、增值快，并且传代稳定性好，即便传代18代以上毒株的抗原决定蔟(RBD)区域序列依然无明显变化，因而可适于病毒的大规模培养，并适合用作疫苗株进行使用。本发明还确定了该毒株的最佳灭活条件，并首次获得新型冠状病毒灭活疫苗。

技术领域

本发明涉及疫苗领域，具体而言，涉及新型冠状病毒及其培养方法，以及新型冠状病毒灭活疫苗。

背景技术

严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2，或译为严重急性呼吸综合征冠状病毒2、严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)是一种具有包膜的正链单股RNA病毒，属于冠状病毒科乙型冠状病毒属严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒种。它的基因序列和SARS病毒及MERS病毒属于同一谱系但不同进化枝，是已知的第七种可感染人类的冠状病毒。病毒的宿主包括哺乳动物和禽类动物，它造成了于2019年底暴发的2019冠状病毒病(COVID-19)。SARS-CoV-2病毒可通过人类上呼吸道入侵人体，以多种细胞表面表达的ACE2为受体达到感染，主要感染器官包括肺部、心脏、肾脏等多个主要器官。

疫苗作为预防新冠病毒感染的手段之一，是目前全球都在攻克的难题。灭活疫苗具有安全性和免疫原性好等特点，是新冠病毒预防的重要手段。新型冠状病毒作为一种新发传染病，目前尚未有可供人使用的新型冠状病毒灭活疫苗上市生产。

发明内容

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种新型冠状病毒，其于2020年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:V202039，毒株名称为2019-nCoV/K-T13。

根据本发明的一方面，还涉及如上所述新型冠状病毒的培养方法，包括将所述新型冠状病毒接种于细胞中，于合适的培养条件下进行培养，并收获如此培养得到的病毒。

本发明还涉及如上所述的新型冠状病毒的灭活方法，包括：

将所述新型冠状病毒与β-丙内酯按照1:(3000～5000)的比例共孵育6小时以上。

本发明还涉及一种新型冠状病毒灭活疫苗，其包含如上所述的灭活病毒。

本发明还涉及一种成套试剂盒，其包含如上所述的疫苗，以及用于接种所述疫苗的容器。

本发明的有益效果为：

(1)本发明提供了一种新型冠状病毒的毒株，该毒株的培养效价高、增值快，并且传代稳定性好，即便传代18代以上毒株的抗原决定蔟(RBD)区域序列依然无明显变化，因而可适于病毒的大规模培养，并适合用作疫苗株进行使用。

(2)通过摸索，确定了该毒株的最佳灭活条件，并首次获得新型冠状病毒灭活疫苗。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中10倍显微镜下新冠病毒感染Vero细胞的病变图；

图2为本发明一个实施例中10倍显微镜下Vero细胞的阴性对照图；

图3为本发明一个实施例中新冠病毒K-T13疫苗株的电镜图；