[发明专利]一种对植物中降糖功能化合物的筛选及分离方法

权利要求书

1.一种对降糖化合物分离的方法，其特征在于，针对植物中降糖功能化合物的筛选方法得到的降糖化合物，采用逆流色谱制备目标成分峰，按照目标峰收集相应组分，减压浓缩，得到样品，利用液相色谱分析分离物，所述降糖化合物为β-熊果苷和6-O-没食子酰熊果苷；

当植物为岩白菜，葡萄糖苷酶为α-葡萄糖苷酶时，逆流色谱的溶剂系统为：叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水，体积比为1:3:1:5，上相为固定相，下相为流动相，转速为800转/min，流速为2.0 mL/min，检测波长254 nm，进样量：1.0 g。

2.如权利要求1所述的对降糖化合物分离的方法，其特征在于，所述的植物中降糖功能化合物的筛选方法为对植物进行萃取得到粗提物，将粗提物与葡萄糖苷酶孵育，酶与混合物通过超滤膜，去除未结合的成分，使酶失活，去除，对剩余组分进行液相色谱分析，即得植物中具有降糖功能化合物；

获得岩白菜粗提物的步骤包括：将岩白菜浸泡，并用提取剂提取，重复3次；合并所有提取液，旋转蒸发至干；

所述岩白菜的用量为5kg；

所述提取剂为2×12L的80%乙醇；

提取时间为24 h；

在40℃下旋转蒸发至干；

将粗提物在4℃的冰箱中储存备用。

3.如权利要求2所述的对降糖化合物分离的方法，其特征在于，所述葡萄糖苷酶为α-葡萄糖苷酶；

所述α-葡萄糖苷酶与粗提物的孵育步骤包括：将粗提物和α-葡萄糖苷酶在醋酸盐缓冲液下孵育一段时间，孵育后，将酶与混合物通过超滤膜，离心15分钟，缓冲液清洗3次，离心，去除未结合的成分，使酶失活，进行液相色谱分析；

醋酸盐缓冲液的pH 为6-7；

粗提物和α-葡萄糖苷酶25-38°C下孵育25-40分钟；

所述超滤膜截留分子量为30000 Da；

所述粗提物与α-葡萄糖苷酶体积比为4-6:1；

酶失活步骤包括：酶加入甲醇/水，离心，收集离心液体，

所述甲醇和水的体积比为1:1，pH为3-4。

4.如权利要求3所述的对降糖化合物分离的方法，其特征在于，醋酸盐缓冲液的pH 为6.8；

粗提物和α-葡萄糖苷酶37°C下孵育30分钟；

所述粗提物与α-葡萄糖苷酶体积比为5:1；

所述甲醇和水混合物的pH为3.30。

5.如权利要求1或2所述的对降糖化合物分离的方法，其特征在于，液相色谱条件为：5μm, 4.6 mm× 250 mm, i.d.的Waters Symmetry C18 column ，紫外检测波长254 nm，流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL；流动相A采用水，B采用乙腈，0-5 min, 88%A；5-15 min，88%-70%A；15-20 min，70% A；20-21 min，70%-88%A；21-25 min，12%B。