[发明专利]一种糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法

权利要求书

1.一种糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法，其特征在于，所述糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法包括以下步骤：

步骤一，建立和优化表面加强激光解吸电离飞行时间质谱技术模型；

步骤二，进行糖尿病肾病晨尿上清液中蛋白质指纹图谱的确定以及诊断模型的建立；

步骤三，进行糖尿病肾病血清中蛋白质指纹图谱的确定以及诊断模型的建立；

步骤四，进行糖尿病肾病肾脏皮质标本中蛋白质指纹图谱的确定以及诊断模型的建立；

步骤五，依据建立的蛋白质指纹图谱以及诊断模型进行糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测。

2.如权利要求1所述糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法，其特征在于，步骤一中，所述建立和优化表面加强激光解吸电离飞行时间质谱技术模型包括以下步骤：

(1)进行糖尿病肾病患者晨尿、血液以及肾脏皮质标本的获取；

(2)设定离心力为16000xg-100000xg，对获取的晨尿进行离心，离心时间为10-15min；将离心后的尿液进行收集，取上清液备用；

(3)将获取的血液置于离心管中，在37℃环境下静置，待血液凝固后进行平衡；设定转速为3000-3500rpm进行离心，得到上清液即血清，备用；

(4)采用磁珠对晨尿上清液、血清以及获取的肾脏皮质标本中的蛋白进行吸附；

(5)采用蛋白质芯片，通过加强激光解吸电离飞行时间质谱技术进行晨尿上清液、血清以及标本总蛋白的蛋白质谱测定。

3.如权利要求2所述糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法，其特征在于，所述肾脏皮质标本的获取包括以下步骤：

1)进行组织穿刺，进行浅红色肾皮质组织的获取；

2)将获取的肾皮质组织置于10％中性福尔马林中浸泡8h；

3)使用脱水机进行浸泡后组织的脱水；

4)脱水后使用石蜡进行包埋，得到肾脏皮质标本。

4.如权利要求2所述糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法，其特征在于，所述通过加强激光解吸电离飞行时间质谱技术进行晨尿上清液、血清以及标本总蛋白的蛋白质谱测定具体包括：

步骤Ⅰ，获取糖尿病肾病晨尿上清液蛋白质谱图谱、血清蛋白质谱图谱、肾脏皮质标本蛋白质谱图谱；

步骤Ⅱ，用标准蛋白及质谱的标准化质控O型血清校正仪器，使蛋白质分子量误差＜0.01％且临界峰值均值M的CV＜5～10％；

步骤Ⅲ，将步骤Ⅰ获取的糖尿病肾病患者的蛋白质谱图谱中的晨尿上清液中的蛋白、血清中的蛋白、肾脏皮质标本中的蛋白的质谱图谱与正常人的蛋白质谱图谱进行对比，得到糖尿病肾病患者与正常人蛋白质谱图谱差异；

步骤Ⅳ，将步骤Ⅳ得到的差异进行处理，差异蛋白即糖尿病肾病蛋白质谱模型的特征蛋白；

步骤Ⅴ，分别选取糖尿病肾病晨尿上清液蛋白质谱模型以及血清蛋白质谱模型的特征蛋白中的两个或是两个以上的蛋白，以各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M构成用于检测糖尿病肾病晨尿上清液及血清特征蛋白质谱模型。

5.如权利要求4所述糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法，其特征在于，步骤Ⅰ中，所述获取糖尿病肾病晨尿上清液蛋白质谱图谱具体为：采用用激光解吸/电离飞行时间质谱仪，对吸附的晨尿上清液中的蛋白进行读取；依照读取数据获得晨尿上清液蛋白质谱图谱。

6.如权利要求4所述糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法，其特征在于，步骤Ⅰ中，所述获取糖尿病肾病血清蛋白质谱图谱具体为：采用用激光解吸/电离飞行时间质谱仪，对吸附的血清中的蛋白进行读取；依照读取数据获得血清蛋白质谱图谱。

7.如权利要求4所述糖尿病肾病血清标本中差异表达的蛋白质谱检测方法，其特征在于，步骤Ⅰ中，所述获取糖尿病肾病肾脏皮质标本蛋白质谱图谱具体为：采用用激光解吸/电离飞行时间质谱仪，对吸附的肾脏皮质标本中的蛋白进行读取；依照读取数据获得肾脏皮质标本蛋白质谱图谱。