[发明专利]一种气压加速型核酸印迹转膜装置及其转膜方法

说明书

本发明公开了一种气压加速型核酸印迹转膜装置及其转膜方法。现有转膜装置的转膜通常需要16‑18h，过程较长。本发明包括底板、充气仓、中间转膜平台、进气管和气源。充气仓安装在底板上。充气仓的内腔通过一根或多根进气管与气源连接。所述的中间转膜平台的底部位于充气仓内，顶部从充气仓的顶部伸出。所述的气源包括分流管、压力调节器和气泵。压力调节器的进气口与气泵的出气口连通，出气口经一根或多根进气管连接到充气仓的内腔。通过增大气压的方式向缓冲液增加，从而大大缩短了转膜时间，由原来的16‑18h缩短至1.5h；此外，本发明的充气仓还起到了加固中间转膜平台的作用，使得转膜装置的结构更加稳固，且膜不易发生偏移。

技术领域

本发明属于核酸印迹转膜技术领域，具体涉及一种气压加速型核酸印迹转膜装置及其转膜方法。

背景技术

SouthernBlot(即southern印迹杂交)是研究DNA图谱的基本技术，具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，显色后检测特定DNA分子的含量。该方法是端粒长度检测最为经典的端粒长度测量方法，被称为端粒长度测量的“金标准”。

该方法主要运用毛细管印迹转膜法，利用含有高浓度NaCl和柠檬酸钠的转移缓冲液和上层吸水纸的虹吸作用使缓冲液通过滤纸桥、滤纸、凝胶、尼龙膜向上运动，同时带动凝胶中的DNA片段垂直向上运动，凝胶中的DNA片段移出凝胶而滞留在膜上。该方法操作简单，但没有固定的仪器设备；尼龙膜上需要铺设有高度为12cm的吸水滤纸层，吸水滤纸层上压400g-700g的重物，转膜期间每小时需要更换吸水滤纸层，操作较为繁琐，且在更换过程中容易导致尼龙膜移位；转膜通常需要16-18h，过程较长；吸水滤纸层没有固定的支撑结构，稳固性较差，容易发生侧翻，且易产生左右两边吸水速度不同、重物压力不平衡等引起的膜上DNA分布不均匀等情况导致实验失败。

发明内容

本发明的目的在于提供一种气压加速型核酸印迹转膜装置及其转膜方法。

本发明一种气压加速型核酸印迹转膜装置包括底板、充气仓、中间转膜平台、进气管和气源。充气仓安装在底板上。所述的中间转膜平台的底部位于充气仓内，顶部从充气仓的顶部伸出。所述的气源包括分流管、压力调节器和气泵。压力调节器的进气口与气泵的出气口连通，出气口经一根或多根进气管连接到充气仓的内腔。进气管的出口高于充气仓内腔的液面。

所述的中间转膜平台包括转膜筒、支撑海绵、第一吸水滤纸层、琼脂糖凝胶、封胶膜、尼龙膜、第二吸水滤纸层。转膜筒呈筒状，且竖直设置。转膜筒的底部设置在充气仓内腔的底部，且浸入缓冲液中。转膜筒的中部穿过充气仓的顶板伸出。转膜筒的内腔由下至上设置有支撑海绵、第一吸水滤纸层、琼脂糖凝胶、封胶膜、尼龙膜和第二吸水滤纸层。

作为优选，所述的转膜筒与充气仓的顶板的连接处密封设置；转膜筒由两段能够分离的下半段筒身和上半段筒身对接组成；下半段筒身与上半段筒身通过套接卡合部可拆卸连接在一起；套接卡合部与上半段筒身的底部固定；下半段筒身的顶部伸入套接卡合部内；下半段筒身的顶部高于充气仓顶面。

作为优选，所述的进气管共有四根；四根进气管分别安装在充气仓四个侧面的外侧。

作为优选，所述充气仓的顶部设置有进液口，底部设置有出液口。充气仓的进液口和出液口均能够封闭。

作为优选，所述的第一吸水滤纸层由叠置的两张吸水滤纸组成。第二吸水滤纸层由叠置的多张吸水滤纸组成，厚度为10～12cm。

作为优选，所述的第二吸水滤纸层的上方放置有带孔金属板。带孔金属板的上方设置有一个或多个重物。

作为优选，所述转膜筒的底端与充气仓的内腔底面间隔设置，或转膜筒的侧壁底部开设有多个通孔。