[发明专利]一个玉米籽粒直链淀粉含量相关的分子标记

权利要求书

1.玉米籽粒直链淀粉含量相关的分子标记或者分子标记引物在鉴定玉米籽粒直链淀粉野生型基因Ae1和突变体基因ae1中的应用，

所述分子标记如下：

与玉米籽粒直链淀粉野生型基因Ae1检测相关的核苷酸序列如下：

AAACCTGCATACGGATAAAATTGTTGGAACGATACAGGCAGAAAAATAGGAGAATAAAATTAATGGAGATAGAGCATTTTTGTTCCGTACTTCCCAGTTCCCATAGTTAAATAGGCGAGAATCCCACATCCAGTGATGGCCACGTGGACCACTGTGAAAGTAATGTGTATCTGTACCATCAAAACCATTCAACCCATCCAGAGTATTACTTGACGCATGACTGCAAGTAACACAAAAGCAAAGTTAAAGGTATGAAACCAAAGAGCTTCAAATAATCATAAGGTTGTACATAACAGATTATAATCGATCTCATCCCAAAGCTTGGAAGCCAAAGAACCTTGAACCACGACAAATAGGTTTCCA；

与玉米籽粒直链淀粉突变体基因ae1检测相关的核苷酸序列如下：

AAACCTGCATACGGATAAAATTGTTGGAACGATACAGGCAGAAAAATAGGAGAATAAAATTAATGGAGATAGAGCATTTTTGTTCCGTACTTCCCAGTTCCCATAGTTAAATAGGCGAGAATCCCACATTCAGTGATGGCCACGTGGACCACTGTGAAAGTAATGTGTATCTGTACCATCAAAACCATTCAACCCATCCAGAGTATTACTTGACGCATGACTGCAAGTAACACAAAAGCAAAGTTAAAGGTATGAAACCAAAGAGCTTCAAATAATCATAAGGTTGTACATAACAGATTATAATCGATCTCATCCCAAAGCTTGGAAGCCAAAGAACCTTGAACCACGACAAATAGGTTTCCA；

所述分子标记引物如下：

dCAPS-F：5’-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggctAGTTAAATAGGCGAGAATCCCGGAT-3’；

dCAPS-R:5’-CATGCGTCAAGTAATACTCTGGATGGG-3’。

2.一种鉴定玉米籽粒直链淀粉野生型基因Ae1和突变体基因ae1的方法，其特征是：

(1)以待测玉米材料的基因组DNA为模板，以dCAPS-F和dCAPS-R引物进行PCR扩增；

dCAPS-F：5’-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggctAGTTAAATAGGCGAGAATCCCGGAT-3’；

dCAPS-R:5’-CATGCGTCAAGTAATACTCTGGATGGG-3’；

(2)对步骤(1)得到的PCR产物进行限制性内切酶BamH I酶切后利用高浓度琼脂糖凝胶电泳进行分离，如果所得酶切产物仅有144bp的DNA片段，则待测玉米材料为具有ae1/ae1基因型且直链淀粉含量高的材料；若所得酶切产物为93bp和51bp的两个DNA片段，则待测玉米材料为具有Ae1/Ae1基因型且直链淀粉含量低的材料；若所得酶切产物为144bp、93bp和51p三个DNA片段，则待测玉米材料为具有Ae1/ae1杂合基因型且直链淀粉含量低的材料。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是，所述步骤(1)的PCR所采用的25μL PCR体系为：10μmol/L的正向引物1μL，10μmol/L的反向引物1μL，基因组DNA 1μL，EasyTaq DNA聚合酶0.2μL，buffer 2.5μL，dNTPs 2μL，ddH₂O补足至25μL。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征是，所述PCR反应程序为：95℃预变形5min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃过度延伸5min；16℃保存。