[发明专利]一种脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法在审
| 申请号： | 202010874213.2 | 申请日： | 2020-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN111808851A | 公开（公告）日： | 2020-10-23 |
| 发明（设计）人： | 段志峰 | 申请（专利权）人： | 广州源古纪科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510507 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脑积水 微生物 宏基 dna 快捷 提取 方法 | ||
1.一种脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，所述快捷提取方法包括以下步骤：
S1：样本处理：将体积比为1:1的脑积水样本与第一缓冲液混合、45～50℃孵育15～20min、离心去上清后，加入第一缓冲液和溶菌酶37℃孵育30min～1h，再经20mg/ml蛋白酶K与10wt％CTAB 37℃处理20～30min，然后加入浓度为20％的阴离子表面活性剂，60℃裂解细胞1～2h，离心获得含DNA的上清液和沉淀；
S2：样本混合：在步骤S1所得沉淀中加入第二缓冲液和浓度为20％的硬脂酸钠混合、60℃水浴15～20min然后-80℃冷冻10～15min，反复冻融三次后，离心取上清液，与步骤S1所得上清液混合；步骤S1所得沉淀与第二缓冲液的体积比为1:1；浓度为20％的阴离子表面活性剂与第二缓冲液的体积比为1:1；
S3：DNA提取和纯化：加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇抽提蛋白，再用异丙醇进行沉淀1～2h；将混合液加入到离心纯化柱中，经离心TE洗脱后收集离心管中液体，即为脑积水微生物宏基因组DNA溶液；
所述第一缓冲液的pH为7.5，包括0.2M EDTA2Na，0.1M Tris-HCl，1.5M NaCl，0.1MNaH2PO4和0.1M Na2HPO4；
所述第二缓冲液的pH为7.5，包括0.1M EDTA，0.1M Tris-HCl，1.5M NaCl，0.1MNaH2PO4、0.1M Na2HPO4和1wt％CTAB。
2.根据权利要求1所述的脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述裂解细胞的时间为1.5h。
3.根据权利要求1所述的脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，步骤S3中，所述TE洗脱的次数为1～3次。
4.根据权利要求1所述的脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，所述步骤S1和S2中所述阴离子表面活性剂为硬脂酸钠和/或十二烷基硫酸钠。
5.根据权利要求4所述的脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为硬脂酸钠和十二烷基硫酸钠的混合物。
6.根据权利要求5所述的脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，所述硬脂酸钠和十二烷基硫酸钠比例为1～2。
7.根据权利要求1所述的脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，经20mg/ml蛋白酶K与CTAB 37℃处理20min中，边振摇边混匀，所述振摇频次为1min/次。
8.根据权利要求1所述的脑积水微生物宏基因组DNA的快捷提取方法，其特征在于，所述溶菌酶的浓度为20～40mg/ml。
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