[发明专利]鸭呼肠孤病毒及其抗原抗体复合物的制备方法和应用有效
申请号: | 202010874869.4 | 申请日: | 2020-08-27 |
公开(公告)号: | CN112080477B | 公开(公告)日: | 2023-05-16 |
发明(设计)人: | 张立武;魏思远;赵光伟;杨晓伟 | 申请(专利权)人: | 重庆三杰众鑫生物工程有限公司 |
主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00;C07K16/10;A61K39/15;A61K39/42;A61P31/14 |
代理公司: | 成都市智恒博雅知识产权代理事务所(普通合伙) 51379 | 代理人: | 邓黎 |
地址: | 402460 重庆市荣昌*** | 国省代码: | 重庆;50 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 鸭呼肠孤 病毒 及其 抗原 抗体 复合物 制备 方法 应用 | ||
1.一种鸭呼肠孤病毒SL株,保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC No: V201970。
2.一种鸭呼肠孤病毒抗原抗体复合物的制备方法,其特征是,包括下述步骤:
A、将权利要求1中所述的鸭呼肠孤病毒SL株进行病毒繁殖,制备抗原;
B、将步骤A中制备的抗原制备鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体;
C、以蜂胶粉为原料制备鸭呼肠孤病毒蜂胶佐剂抗原;
D、以步骤B中制备的鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体和步骤C中制备的鸭呼肠孤病毒蜂胶佐剂抗原按1:1比例混合均匀,即得鸭呼肠孤病毒抗原抗体复合物成品。
3.根据权利要求2所述制备方法,其特征是,所述步骤A中抗原的制备步骤为:
A1、接种:将权利要求1中所述的鸭呼肠孤病毒SL株用灭菌生理盐水1000倍稀释,按每胚0.2 mL经尿囊腔接种11日龄易感鸭胚,然后用蜡封孔,于37~37.3℃静置孵育;
A2、孵育和观察:观察步骤①中进行静置孵育的鸭胚,弃去48h内死亡鸭胚,收集48~120h死亡鸭胚,然后于4℃冷却6~12h;
A3、收获:对步骤②中冷却鸭胚的用75%的酒精对蛋壳进行消毒,并用碘酊再次对蛋壳表面气室部消毒,无菌操作除去气室部蛋壳,收获胚液,置于灭菌容器内,标记,即为抗原,置-20℃保存。
4.根据权利要求3所述制备方法,其特征是,所述步骤A1中制备的抗原的病毒含量≥10-5.0ELD50/0.2mL。
5.根据权利要求2所述制备方法,其特征是,所述步骤B中鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体的制备步骤为:
B1、抗原浓缩与灭活:抗原于2~8℃条件下解冻、混合批组,加入终浓度为4.8%氯仿,振摇10min,于4℃条件下4000r/min离心30min,取上清液用截留分子量为6KD的中空纤维超滤柱浓缩5倍,浓缩液加入终浓度为0.2%的甲醛溶液,置37~37.5℃温箱中灭活24h,其间4~6h振摇1次,每次3分钟,于2~4℃保存;
B2、免疫抗原的制备:油相制备,取94份注射用白油,加入2份硬脂酸铝,边加边搅拌,加热直至完全透明,再加入6份司本-80,充分混匀,121℃高压灭菌30min,冷却至室温;水相制备,灭活抗原96份加入4份灭菌的吐温-80,充分振摇后使吐温-80完全溶解;乳化、油相与水相按体积比2:1的比例初步混合、振摇3~5分钟,加入均质机料斗,调节压力为34~37MPa进行乳化,检验合格以后分装标记,于2~8℃保存;
B3、高免鸡蛋生产:产蛋鸡按基础免疫、加强免疫、强化免疫、维持免疫,强化免疫后7日,抽样取蛋检测鸭呼肠孤病毒卵黄中和抗体效价≥1:512为合格,收集鸡蛋,于湿度30~60%、温度10~15℃条件下避光储存;
B4、鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体制造:将蛋壳有粪污的高免鸡蛋单独挑出,用自来水清洗干净,与蛋壳洁净的高免鸡蛋一起摆入塑料蛋盘中,浸入40℃的0.1%苯扎溴铵水溶液中15min,而后在95℃自来水中浸泡5s;手工或机械打蛋,除去蛋清、胚盘和系带,收集卵黄;卵黄转入反应罐中,搅拌呈膏状,加入与卵黄等体积的注射用水25℃搅拌均匀;加入7倍于原卵黄体积的酸化水搅拌均匀,降温至2~4℃,静置12~15h;吸取上清液,转入搅拌罐中,加入终浓度为1.0%的辛酸,搅拌均匀,20~25℃条件下作用4~6h;收集80~90%下层液,用孔径为1μm的筒式滤芯粗滤,收集滤液,将罐内剩余物搅拌均匀,用连续管式离心机离心,收集离心液,合并滤液和离心液;用1~2M氢氧化钠溶液调节pH值为5.5~7.5,用孔径为0.45μm的筒式滤芯过滤澄清,用孔径为0.22μm筒式滤芯过滤除菌;根据高免鸡蛋的鸭呼肠孤病毒卵黄中和抗体效价和卵黄稀释倍数,滤液用截留分子量为30KD的中空纤维超滤器进行适当倍数的浓缩,预期使鸭呼肠孤病毒中和抗体效价≥1:512;加入终浓度为0.05%的甲醛溶液搅拌均匀,20~25℃下灭活24h,即为抗体半成品,而后于2-8℃保存备用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于重庆三杰众鑫生物工程有限公司,未经重庆三杰众鑫生物工程有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010874869.4/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:一种强鬼影去除多曝光图像融合方法
- 下一篇:一种极耳制备方法