[发明专利]一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代真实性的SSR分子标记及其方法

说明书

本发明属于遗传育种领域，具体涉及一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代真实性的SSR分子标记及其方法，所述SaSSR分子标记采用包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1～20所示的10个引物对进行扩增，扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测，通过对条带的分析，鉴定了甘蔗和斑茅杂交后代的真实性。本发明的SaSSR分子标记是在甘蔗与斑茅间扩增条带存在差异的一组特异性的SSR标记，保证了标记在斑茅不同的染色体的均匀分布，特别适用于甘蔗与斑茅高代材料的鉴定。

技术领域

本发明属于遗传育种领域，具体涉及一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代真实性的SSR分子标记及其方法。

背景技术

甘蔗是重要的糖料作物和能源作物之一，甘蔗生产的发展对促进农业和相关产业的发展都具有重要的地位和作用。目前甘蔗的发展主要集中在培育高产、高抗和高糖的甘蔗新品种，而甘蔗新品种可通过常规杂交育种或转基因育种等方式来实现。开展远缘杂交，将野生资源中的优异基因导入到栽培种中，是提高甘蔗品种的适应性、抗逆性，宿根性的重要途径。斑茅是甘蔗近缘属物种之一，具有高生物量、适应性广、耐旱、抗病虫、生势旺盛、宿根性好等优点，是甘蔗品种改良的原始亲本材料。1995年，我国在甘蔗与斑茅杂交育种取得重要突破，从Badila×海南92-77(E.arundinaceus)等杂交组合中选育出崖城95-41、崖城96—40等9个斑茅杂种F1单系，2001年育成一批经鉴定为斑茅真杂种的回交品系(BC1)，攻克了斑茅与甘蔗杂交无法培育出真实F2的世界性难题，得到国内外同行的肯定和关注。此后，经过持续杂交与回交，又成功培育出含有斑茅血缘的杂种品系，部分优异品系已经成为甘蔗杂交育种的重要亲本。

在甘蔗与斑茅杂交回交过程中，斑茅染色体与甘蔗染色体不能完全配对，存在染色体丢失现象，随着回交代数的增加，斑茅染色体会逐步减少，因此，建立快速高效鉴定斑茅遗传物质的方法，在甘蔗与斑茅杂交育种中具有重要的应用价值。目前，对甘蔗与斑茅的杂交后代是否含有斑茅血缘的鉴定方法主要通过基因组原位杂交(genomic in situhybridization,GISH)和分子标记技术。这两种方法中，GISH技术进行杂交后的鉴定，需要周期长、技术难度高，通常需要专业的人员进行，无法进行早期的鉴定。分子标记具有技术难度小，对仪器设备要求不高，不受生长周期限制，易操作等优点，在杂交后代鉴定汇总具有明显的技术优势。目前已经有关于利用分子标记进行甘蔗中斑茅血缘鉴定的分子标记，如5S rDNA，ITS等标记。但是，现有标记是基于个别材料开发，标记的数量和对基因组的覆盖度不够，在甘蔗与斑茅高代回交与杂交中，因存在染色体丢失等情况，无法有效地检测真实杂交后代。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一，为此，本发明以斑茅和最具代表性的甘蔗为亲本材料，按照每条染色体上40对SSR标记原则，对400对斑茅简单重复序列(Saccharum arundinaceum Retz.simple sequence repeat，SaSSR)标记进行筛选，最终开发出一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代真实性的SSR分子标记的组合，及相应的鉴定方法。

因此，本发明的第一个目的在于提供一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代真实性的SSR分子标记。

本发明的第二个目的在于提供一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代真实性的方法。

本发明的第二个目的在于提供一种鉴定甘蔗与斑茅杂交后代真实性的试剂盒。

本发明所采用的技术方案如下文所述。

本发明的一方面涉及一种SaSSR引物组，包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示的引物对；

核苷酸序列如SEQ ID NO:3～4所示的引物对；

核苷酸序列如SEQ ID NO:5～6所示的引物对；

核苷酸序列如SEQ ID NO:7～8所示的引物对；