[发明专利]一种基于DNA电化学传感器的食品中沙门氏菌检测方法

权利要求书

1.一种基于DNA电化学传感器的食品中沙门氏菌检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)食品中沙门氏菌培养；

(2)沙门氏菌DNA提取；

(3)PCR扩增；

(4)凝胶电泳；

(5)使用DNA电化学传感器检测沙门氏菌。

2.根据权利要求1所述的一种基于DNA电化学传感器的食品中沙门氏菌检测方法，其特征在于：培养食品中的沙门氏菌，提取沙门氏菌中DNA，以invA引物进行PCR，产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，扩增PCR产物，同时使用DNA电化学传感器对PCR产物进行检测，有效检测PCR产物，即可用DNA电化学传感器成功有效地检测样品中沙门氏菌。

3.根据权利要求2所述的一种基于DNA电化学传感器的食品中沙门氏菌检测方法，其特征在于：扩增PCR产物指的是扩增284bp大小的PCR产物。

4.根据权利要求1所述的一种基于DNA电化学传感器的食品中沙门氏菌检测方法，其特征在于：所述的用于沙门氏菌检测的DNA电化学传感器的制备方法，

包括以下步骤：

(1)电极预处理；

(2)电极组装；

首先，滴加5-6μL浓度1.0mg/mL-1聚吡咯-还原氧化石墨烯PPy-rGO溶液到预处理后的电极表面，将电极置于干燥器中，静置1.8-2.2h，获得聚吡咯-还原氧化石墨烯修饰电极PPy-rGO/GCE；

将聚吡咯-还原氧化石墨烯修饰电极PPy-rGO/GCE置于浓度为3-4mM的HAuCl₄与浓度为0.1M KNO₃的混合溶液中，在恒定电位-0.2V下电沉积50-55s，用超纯水洗涤电极，用N₂吹干，得到金纳米粒子修饰后电极depAuNP/PPy-rGO/GCE；用移液器取5-6μL的10μM cDNA滴加到所得电极表面，放置11-12小时，之后电极依次用浓度0.1％的SDS溶液和pH 7.4的10mM的Tris-HCl缓冲液洗去未结合在电极表面的探针，待电极表面干燥后滴加浓度2％的BSA溶液100-110μL，放置58-62min以消除非特异性吸附，得到的DNA传感界面BSA/cDNA/depAuNP/PPy-rGO/GCE电极；

将100-110μL浓度为100pM的tDNA与10-11μL的浓度为10μM的bio-DNA溶液混合均匀，将上述DNA传感界面BSA/cDNA/depAuNP/PPy-rGO/GCE电极浸泡在此溶液中，36-38℃下温育1-1.1h，得到bio-DNA/tDNA/BSA/cDNA/depAuNP/PPy-rGO/GCE电极；

之后再在所得电极上滴加亲和素-辣根过氧化物酶修饰的金纳米粒子AuNPs-HRP-SA复合物5-6μL，室温下放置30-32min，Tris-HCl缓冲液清洗并用N₂吹干得到AuNPs-HRP-SA/bio-DNA/tDNA/BSA/cDNA/depAuNP/PPy-rGO/GCE，即得。

5.根据权利要求4所述的一种基于DNA电化学传感器的食品中沙门氏菌检测方法，其特征在于：所述的电极预处理方法为：首先将直径为3mm的玻碳电极用1200目SiC砂纸打磨1-2min，再依次用1.0、0.3和0.05μm的Al₂O₃抛光至镜面；再依次用1:1的硝酸水溶液、1:1的乙醇和超纯水超声清洗3-4min；以5mM Fe(CN)₆^3-/4-溶液为底液，将电极在-0.2～0.6V范围内循环伏安获得一对可逆氧化还原峰，当峰差小于80mV时，说明电极表面清洁可用，否则重新处理电极，直到电极符合要求，最后用二次蒸馏水清洗再用氮气吹干。