[发明专利]一种基因修饰的免疫细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括DAP10蛋白和信号传导结构域，所述信号传导结构域连接在所述DAP10蛋白的C端；

所述DAP10蛋白为胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；

所述信号传导结构域包括CD3ζ；

所述信号传导结构域还包括4-1BB；

所述DAP10蛋白包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

所述嵌合抗原受体还包括抗原结合结构域，所述抗原结合结构域连接在所述DAP10蛋白的N端；

所述抗原结合结构域包括靶向肿瘤表面抗原的单链可变区；

所述肿瘤表面抗原为GPC3或Mesothelin；

所述嵌合抗原受体由靶向肿瘤表面抗原的单链可变区、DAP10蛋白、4-1BB和CD3ζ串联组成；

所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。

2.一种编码基因，其特征在于，所述编码基因编码权利要求1所述的嵌合抗原受体。

3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求2所述的编码基因。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为含有权利要求2所述的编码基因的病毒载体。

5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为含有权利要求2所述的编码基因的逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种。

6.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为含有权利要求2所述的编码基因的慢病毒载体。

7.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒由转染有权利要求3-6任一项所述的表达载体和辅助质粒的哺乳细胞制备得到。

8.一种嵌合抗原受体免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体免疫细胞表达权利要求1所述的嵌合抗原受体。

9.根据权利要求8所述的嵌合抗原受体免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体免疫细胞的基因组中整合有权利要求2所述的编码基因。

10.根据权利要求9所述的嵌合抗原受体免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体免疫细胞包括权利要求3-6任一项所述的表达载体和/或权利要求7所述的重组慢病毒。

11.根据权利要求10所述的嵌合抗原受体免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体免疫细胞为表达权利要求1所述的嵌合抗原受体的T细胞。

12.根据权利要求10所述的嵌合抗原受体免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体免疫细胞为表达权利要求1所述的嵌合抗原受体的NK细胞。

13.一种权利要求8-12任一项所述的嵌合抗原受体免疫细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1所述的嵌合抗原受体的编码基因导入免疫细胞的步骤。

14.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求8-12任一项所述的嵌合抗原受体免疫细胞。

15.根据权利要求14所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。

16.一种权利要求1所述的嵌合抗原受体、权利要求2所述的编码基因、权利要求3-6任一项所述的表达载体、权利要求7所述的重组慢病毒、权利要求8-12任一项所述的嵌合抗原受体免疫细胞或权利要求14或15所述的药物组合物在制备疾病治疗药物中的应用；

所述疾病为肿瘤；

所述肿瘤为肝癌、肺癌或胃癌。