[发明专利]一种检测保健品缓解体力疲劳功能的方法

说明书

本发明属于检测技术领域。本发明公开了一种检测保健品缓解体力疲劳功能的方法，其采用斑马鱼设置正常对照组、模型对照组及供试品组，并通过测定斑马鱼运动总距离S评价保健品的运动能力改善作用，测定斑马鱼乳酸含量C评价保健品的乳酸减少率，测定斑马鱼ROS含量F评价保健品的ROS清除作用，测定斑马鱼体内ATP酶活性依赖性A评价保健品的ATP酶活性增加倍数。本发明实验操作简单，步骤少，且实验动物模型稳定；实验周期相对于小鼠实验，实验周期更短，仅26小时；采用新的模式生物‑‑‑斑马鱼，生物结构和生理功能与哺乳动物高度相似；由于斑马鱼饲养成本低，体积小，发育周期短、单次产卵次数高的特点能同时进行多个供试品的评价。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其是涉及一种检测保健品缓解体力疲劳功能的方法。

背景技术

现在国内抗疲劳、抗缺氧的研究一般采用哺乳动物模型(小鼠或大鼠)作为实验动物，受试样本给予时间为14-30天。测量的方法有运动性疲劳实验、慢性疲劳动物模型实验、常压缺氧耐受力实验、亚硝酸钠中毒存活实验和急性脑缺血性缺氧实验。

运动性疲劳实验：以大鼠的力竭跑步或力竭游泳为运动模式，灌受试样品2周后的大鼠作为服药组，与正常对照组进行力竭运动测试，观察其体重、运动能力以及血浆pH值、血乳酸和血清总钙的变化，对大鼠线粒体丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酮(SOD)活性的改变，肝、肌糖原等指标的变化。

慢性疲劳动物模型实验：正式实验前，各组动物适应性饲养7天，第8天开始采用长时间反复强迫大鼠游泳及束缚四肢(限制大鼠的活动)法，造成慢性疲劳的大鼠模型，造模同时，给药组动物灌胃对应剂量的供试品连续23天，每天1次，空白对照组灌胃相同体积的生理盐水。用悬尾法及力竭游泳法考查模型动物行为学指标，并采用ELISA法测定其细胞因子IL-1b、IL-6及神经递质5-HT的表达量。

常压缺氧耐受力实验：取健康小鼠30只，雌雄各半，随机分为3个组，即大、小剂量实验组及对照组，每组各为10只，每只分别灌胃给予大小剂量实验组小鼠供试品，对照组小鼠灌胃给予等量蒸馏水，连续给予14天，末次灌胃给药后1小时，将小鼠置于放置20g钠石灰的300mL广口瓶中，盖紧瓶盖涂以凡士林密闭，记录小鼠死亡时间，即存活时间。

亚硝酸钠中毒存活实验：取昆明种小鼠50只，体重18-20g，雌雄各半，随机分成正常对照组、供试品低、中、高剂量组、维生素C组，灌胃给药，连续30天。末次灌胃后1小时，各组小鼠均按230mg/kg剂量一次性腹腔注射亚硝酸钠水溶液(注射量为0.1ml，10g)，立即计时,以呼吸停止为指标，记录小鼠存活时间及存活时间延长率。

急性脑缺血性缺氧实验：取昆明种小鼠50只，体重18-20g，雌雄各半，随机分成正常对照组、供试品低、中、高剂量组、维生素C组，灌胃给药，连续30天。末次灌胃后1小时，各组小鼠用锋利剪刀自双耳根后颈部逐只断头，立即按秒表记录每只小鼠断头后张口喘气的持续时间及延长率；同时助手迅速取肝和脑组织，配制成10％的生理盐水匀浆液，用于检测组织中MDA、SOD、GSH-Px的含量，检测方法分别为TBA比色法、黄嘌呤氧化酶法和DTNB直接法。蛋白定量采用考马司亮兰法。

现有技术中存在如下缺陷：1.实验操作复杂，步骤繁琐，且存在实验动物模型的不稳定性、实验观察手段的局限性等技术缺陷，难以优化，还用到更多的模式生物(小鼠)；2.供试品的给予时间一般为15-30天，实验周期太长；3.由于哺乳动物饲养成本高，发育周期长等特点无法同时进行多个供试品的评价。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种能够优化实验流程、减少实验步骤、缩短实验周期、简化抗疲劳实验判断标准并且能同时进行多个供试品评价的检测保健品缓解体力疲劳功能方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种检测保健品缓解体力疲劳功能的方法，包括以下步骤：

a)选取斑马鱼设置正常对照组、模型对照组和供试品组；