[发明专利]新型冠状病毒免疫奶牛所产含特异性抗体牛奶或血清的制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了新型冠状病毒免疫奶牛所产含特异性抗体牛奶或血清的制备方法及其应用。利用灭活的新型冠状病毒hCov‑19/Wuhan/ZY38‑1/2020免疫奶牛，可以获得大量的免疫奶和血清，免疫奶和血清中均含有较高含量抗体，能够有效中和病毒，阻止病毒入侵细胞，具有明显的抗SARS‑CoV‑2病毒的作用；免疫奶纯化的Igs蛋白注射小鼠后，能够显著性的降低新冠病毒感染小鼠的死亡率，减少新冠病毒感染对小鼠体重下降的影响，降低小鼠肺脏组织中的病毒含量。本发明提供的免疫牛奶和血清可以作为新冠肺炎预防和治疗制剂的抗体来源，弥补了新冠肺炎康复血浆来源的限制。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2的特异性抗体阳性牛奶和血清的制备及其应用。

背景技术

由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndromecoronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 19,COVID-19)于2019年底出现并呈现全球爆发，严重危害人类健康和公共卫生安全，给世界社会和经济带来巨大负担，已引发全球范围内的高度关注。截止到2020年7月底，全球累计新冠肺炎确诊病例超过1400万例，死亡人数超过60万。许多国内外学者推测新冠病毒或将类似于流感病毒，与人类长期共存。而且现有的研究报道和数据表明SARS-CoV-2的致死率远高于流感，然而到目前为止还没有专门针对抗新型冠状病毒的治疗和预防制剂或疫苗可以使用，因此亟需找到针对SARS-CoV-2的有效预防和治疗方法。抑制病毒进入细胞是一个很有效的治疗策略。研究报道血管紧张素转化酶2(angiotension convertiong enzyme 2,ACE2)是SARS-CoV的功能性受体，能够与SARS-CoV表面的S蛋白高效结合，SARS-CoV通过细胞表面受体AC E2入侵细胞(Li Wenhui等，2003；Kuba K,2005)。因此，研究人员构建了重组ACE2蛋白，发现其对SARS-CoV具有潜在的治疗作用(Kuba K,2005)。Daniel W等(2020)的报道发现，SARS-CoV-2的S蛋白也能和ACE2受体结合，且亲和力远高于SARS-CoV的S蛋白。VanessaMonteil等(2020)研究报道，在SARS-CoV-2感染细胞之前，先与体外纯化的重组人ACE2蛋白共孵育一段时间，病毒的感染力会急剧下降，下降幅度可达1000-5000倍，研究也发现在SARS-CoV-2感染细胞之前与鼠类的ACE2蛋白共孵育一段时间则无法抑制SARS-CoV-2的感染。但是，研究发现重组rACE2的半衰期只有几个小时，在体内很快就被清除(Wysocki J等，2010；Haschke M等，2013)。在临床上使用新型冠状病毒肺炎康复者的血清对危重症患者具有一定的疗效，但是用康复者血浆治疗病毒感染的方法并不能得到普及，一方面由于治愈康复期患者身体虚弱、不适合献血，另一方面也受到血浆来源等因素的限制。

本发明首次报道了将SARS-CoV-2灭火后免疫奶牛，收集免疫后的血清和牛奶，将其作为一种特殊的“抗体”中和SARS-CoV-2，阻止病毒入侵细胞，是一种专门针对新型冠状病毒感染时的有效预防和治疗性生物制剂。

发明内容

本发明的目的是针对严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)难以预防和治疗的问题，新型冠状病毒hCov-19/Wuhan/ZY38-1/2020毒株在制备含有新型冠状病毒抗体阳性牛奶或血清中的应用，用制备的抗原免疫奶牛产生含有抗SARS-CoV-2病毒的特异性抗体的免疫血清和免疫奶，利用所获得的新冠病毒免疫奶纯化Igs蛋白，用于制备治疗或预防SARS-CoV-2感染的生物制剂。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：