[发明专利]检测对虾虹彩病毒的引物组及含有该引物组的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测对虾虹彩病毒的引物组及含有该引物组的试剂盒，属于水产病原生物检测试剂技术领域。本发明检测对虾虹彩病毒的引物组，根据SEQ ID No:1所示核酸序列设计。本发明引物组灵敏度高、特异性好；使用本申请的引物组检测对虾虹彩病毒不仅克服了现有技术中对大型昂贵仪器依赖、检测操作复杂的问题；而且，适用于水产养殖场等简陋条件的快速测定。

技术领域

本发明属于水产病原生物检测试剂技术领域，具体涉及一种检测对虾虹彩病毒的引物组及含有该引物组的试剂盒。

背景技术

对虾血细胞虹彩病毒(Shrimp hemocyte iridescent virus，SHIV)是2014年在浙江严重死亡的南美白对虾上发现的，感染SHIV的症状表现为失色、肝胰腺断裂、空肠空胃、软壳等；对感染虹彩病毒后对虾组织病理学观察发现，病虾表皮上皮细胞(鳃、胃内层甚至遍布全身)呈现典型的虹彩病毒的感染症状；造血组织，触角腺上皮组织，以及心脏、肌肉、皮下组织、鳃、肝胰腺中的结缔组织细胞和吞噬细胞也被虹彩病毒感染。目前对于该病的传染源和传播途径等尚不清楚；尚无特效药物，盲目使用消毒、杀虫、杀藻等刺激性大的药物反而使病势更猛，病程更长，死亡数更多。

水产病原的快速诊断，对水产养殖的良种选育，疾病预防、进出口检疫、水产品食品安全等方面具有重大意义。当前，水产病原防治中常见的病原检测方法包括组织病理切片观察、病毒分离培养、抗原血清反应、酶联免疫吸附剂测定(ELISA)、核酸杂交技术和一般聚合酶链反应(PCR)技术等。目前的检测方法均存在依赖精密仪器、检测成本高、灵敏性和特异性差，操作程序繁琐，难以推广等缺点；而且常规的病原检测技术大都不适合养殖基层的现场快速检测。

LAMP技术是一种新的DNA扩增方法，该技术依赖于自动循环的链置换反应，通过识别靶序列上6个特异区域的引物和具有链置换的DNA聚合酶，在等温条件下，不到1h就能扩增出10⁹靶序列拷贝，具有特异、灵敏、快速、简便等特点，与普通PCR、荧光定量PCR技术相比，LAMP的优点突出：(1)不需要昂贵的精密仪器，恒温状态即可；(2)扩增效率高，能够获得大量扩增产物；(3)具有高特异性；(4)通过添加Loop引物，可以加快反应，缩短一半的时间；(5)因扩增产生大量的副产物焦磷酸镁白色沉淀，肉眼即可观察结果。因而，可以检测水产经济动物体内的病原菌、病毒、寄生虫和真菌等病原生物，适合于养殖基层的现场快速检测。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种检测对虾虹彩病毒的引物组及含有该引物组的试剂盒，用本发明引物组检测对虾虹彩病毒，不仅克服了现有技术中对大型昂贵仪器依赖、检测操作复杂的问题；而且，本发明引物组的检测灵敏度高、特异性好，适用于水产养殖场等简陋条件的快速测定。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

检测对虾虹彩病毒的引物组，所述引物组序列为：

F3：5’-CGGGAGATGGTGTTAGATGG-3’；

B3：5’-CGTTGCTTGATCGGCATC-3’；

FIP：5’-GCCCAATACGAATCGTTTCCCGTAGTCATGGATGAACCAAATGC-3’；

BIP：5’-TGTTCCAACGAGGAAAGGAAACGTGCTGGAAGCTTGTTGCA-3’；

LF：5’-CCTTTAACGTTCCCGAACTGA-3’；

或

F3：5’-CCCCAACATTGAAATCAGAG-3’；

B3：5’-TTTGCCTTTTTACCCGTAAT-3’；