[发明专利]一种具有促进伤口愈合的干细胞因子修复液的制备方法

权利要求书

1.一种干细胞因子修复液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

s1：提供一待培养的干细胞；

s2：在适合干细胞生长的条件下，对所述干细胞进行预培养，得到第一培养物，所述干细胞被传代培养了6代；

s3：在低氧培养条件下，继续培养所述的第一培养物，得到第二培养液；和

s4：分离所述的第二培养液，从而得到培养上清；

其中，所述预培养的培养条件是指氧气的体积百分比为20-21％，以N2、CO₂和O₂的总体积计；所述的预培养的培养温度为25-40℃；所述预培养的培养时间为2.5-10天；

其中，所述的低氧条件是指氧气的体积百分比为0.5-1.5％，以N2、CO₂和O₂的总体积计；所述低氧培养的时间为24h-36h；所述的低氧条件的培养温度为25-40℃；

其中，所述的干细胞为人脐带干细胞；

所述预培养和低氧培养均采用无血清无酚红培养基；

所述的培养上清包含：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述低氧培养条件为氧气的体积百分比为1％，以N₂、CO₂和O₂的总体积计。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述低氧培养的条件为5％CO₂、1％O₂、94％N₂，以N₂、CO₂和O₂的总体积计。

4.如权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的低氧条件的培养温度为35-38℃。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述低氧培养的时间为24h。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的低氧条件的培养温度为37℃。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的预培养的培养温度为35-38℃。

8.如权利要求1和6-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述预培养条件为：所述干细胞在37℃，5％CO₂、21％O₂和74％N2浓度的常规潮湿环境下培养。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述预培养的培养时间为3-8天。

10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述预培养的培养时间为4-6天。

11.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述低氧培养的条件为5％CO₂、1％O₂、94％N2，以N2、CO₂和O₂的总体积计，所述预培养条件为：所述干细胞在37℃，5％CO₂、21％O₂和74％N2浓度的常规潮湿环境下培养。

12.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：

s5：将稳定剂与得到的培养上清按照1:1-1:10的体积比混合，得到干细胞因子修复液。

13.如权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述的稳定剂为药用甘油和无菌蒸馏水的混合物。

14.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述药用甘油和无菌蒸馏水的体积比为1:1-1:5。