[发明专利]发酵液中内酯型槐糖酯含量的测定方法

权利要求书

1.一种发酵液中内酯型槐糖酯含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤:

(1)标准工作溶液配制

称取槐糖酯标准品，并采用50％乙醇水溶液作为溶剂定容，得到浓度为15mg/mL的溶液A；再采用50％乙醇水溶液稀释溶液A得到0.75mg/mL、1.5mg/mL、7.5mg/mL、12mg/mL的梯度浓度标准工作液；

(2)待测品制备

称取待测品，用50％乙醇水溶液稀释得到浓度为100mg/mL的溶液C，然后进行超声萃取后进行离心处理，最后用离心后的溶液经微孔滤膜过滤得到滤液；

(3)液相色谱分析

采用超高效合相色谱仪对步骤(1)得到的梯度浓度标准工作液和步骤(2)得到的滤液进行分析，利用ELSD检测器进行检测；

色谱条件：采用AQ-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；色谱柱温度为25℃，进样量10μL；流动相包括有A相和B相，所述A相为乙腈，B相为体积百分比为5:95的甲醇：0.01M乙酸铵溶液；流速为0.65mL/min；梯度洗脱条件为：

0min-10min：A相与B相的体积百分比由5％：95％逐步递增至16％：84％，

10min-15min：A相与B相的体积百分比达到16％：84％时保留5min持续洗脱5min；

15min-16min：A相与B相的体积百分比由16％：84％逐步递减至5％：95％；

ELSD检测器的条件为：漂移管温度90℃，增益300，气体流量32psi，喷雾器处于冷却状态。

2.根据权利要求1所述的发酵液中内酯型槐糖酯含量的测定方法，其特征在于，在步骤(2)中，采用40KHz频率的超声波，在26℃温度下超声10分钟。

3.根据权利要求2所述的发酵液中内酯型槐糖酯含量的测定方法，其特征在于，在步骤(2)中，称取超声后的溶液10mL置于离心管中，在8000r/min下离心10min，取5mL经微孔滤膜过滤。

4.根据权利要求3所述的发酵液中内酯型槐糖酯含量的测定方法，其特征在于，所述微孔滤膜为0.20μm。

5.根据权利要求1所述的发酵液中内酯型槐糖酯含量的测定方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述0.01M乙酸铵溶液利用甲酸调配pH为4.75。

6.根据权利要求1所述的发酵液中内酯型槐糖酯含量的测定方法，其特征在于，所述槐糖酯标准品的纯度≥97％。