[发明专利]提高马骨骼肌卫星细胞贴壁培养生长速度的方法及细胞氧化应激培养模型

说明书

本发明公开了一种提高马骨骼肌卫星细胞贴壁培养生长速度的方法，所述方法包括在培养容器中加入明胶溶液，在37℃和5％CO₂环境中放置1‑3h，得到表面形成有明胶铺层的培养容器；将所述马骨骼肌卫星细胞转移至所述表面形成有明胶铺层的培养容器中，并加入增殖培养液，37℃和5％CO₂环境中培养1‑3h，得到贴壁培养马骨骼肌卫星细胞。本发明的方法加速骨骼肌卫星细胞的贴壁速度，缩短其贴壁时间，加快获得骨骼肌卫星细胞。本发明的细胞氧化模型为研究肌肉生长、肌肉氧化损伤等科研院校，为骨骼肌卫星细胞用于肌肉的损伤修复提供有利条件和研究基础，具有巨大的科研和社会价值。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种提高马骨骼肌卫星细胞贴壁培养生长速度的方法及细胞氧化应激培养模型。

背景技术

随着我国社会发展和生产方式的转变，现代马产业主要以赛马、马术运动、骑乘娱乐为主要发展产业，国家和各级政府也已经开始重视现代马产业发展，明确马产业为畜牧业重要的组成部分，积极发展马竞技体育产业。马在运动过程中产生的大量氧自由基会引起氧化应激，使肌细胞膜结构和渗透性的改变，造成肌肉损伤，降低了马的运动性能。骨骼肌卫星细胞是骨骼肌中具有增殖、分化的肌源性干细胞，在骨骼肌再生过程中起着不可或缺的作用，但是一方面骨骼肌卫星细胞在培养过程中存在培养时间长，不易获取等限制或缺点。另一方面细胞氧化应激模型对于研究家畜氧化应激的原理和氧化损伤的体外研究具有重要意义。

目前还没有马的骨骼肌氧化应激模型的公开报道。因此，亟待研发一种提供研究肌肉生长发育，损伤与修复、与氧化应激相关的疾病等方面重要的细胞模型和细胞氧化应激模型。

发明内容

为此，本发明提供提高马骨骼肌卫星细胞贴壁培养生长速度的方法及细胞氧化应激培养模型。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种提高马骨骼肌卫星细胞贴壁培养生长速度的方法，所述方法包括在培养容器中加入明胶溶液，在37℃和5％CO₂环境中放置1-3h，得到表面形成有明胶铺层的培养容器；

将所述马骨骼肌卫星细胞转移至所述表面形成有明胶铺层的培养容器中，并加入增殖培养液，37℃和5％CO₂环境中培养1-3h，得到贴壁培养马骨骼肌卫星细胞。

本发明的一个实施例中，所述表面形成有明胶铺层的培养容器中，去除其中多余的明胶溶液后，用DPBS清洗两遍，再加入所述增殖培养液。

本发明的一个实施例中，所述明胶溶液的质量浓度为0.0025g/ml。

本发明的一个实施例中，所述增殖溶液为20％胎牛血清、1％青霉素链霉素和两性霉素B，DMEM补足。

本发明还提供一种马骨骼肌卫星细胞氧化应激培养模型，向所述方法制备得到的贴壁培养马骨骼肌卫星细胞中，加入含有H₂O₂的刺激培养液中培养，得到马骨骼肌卫星细胞氧化应激培养模型。

本发明的一个实施例中，所述含有H₂O₂的刺激培养液中，H₂O₂浓600μmol/L。

本发明的一个实施例中，所述贴壁培养马骨骼肌卫星细胞在所述表面形成有明胶铺层的培养容器中培养达到70％-80％汇合。

本发明的一个实施例中，所述加入含有H₂O₂的刺激培养液中培养的时间为2-10小时。

本发明具有如下优点：