[发明专利]一种HNTs/RG5纳米复合止血粉的制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种HNTs/RG5纳米复合止血粉的制备方法，该方法为：将天然HNTs纯化后重悬、超声干燥、研磨后，得到HNTs粉末，将短肽RG5溶解于PBS缓冲液中，加入HNTs粉末，震荡混匀、抽真空后离心，将沉淀物洗涤后，低温冷冻真空干燥、研磨得到HNTs/RG5纳米复合止血粉；还提供了应用，用于体外凝血。本发明真空负压循环操作的情况下，克服HNTs纳米管的毛细阻力，吸附短肽RG5进入HNTs管腔，而后进行低温冷冻干燥制备快速止血粉，保证了短肽RG5的活性，HNTs/RG5纳米复合止血粉可在较低浓度时激活血小板从而发挥体外凝血作用。

技术领域

本发明属于纳米止血粉技术领域，具体涉及一种HNTs/RG5纳米复合止血粉的制备方法及其应用。

背景技术

出血是创伤发生后最常见的临床表现之一，无法控制的大出血仍然是和平时代和战时造成死亡率居高不下的主要原因。肽是氨基酸分子按一定的次序经肽键连接而成，广泛存在于生物体内，并具有重要的生理作用。研究发现许多肽类化合物具有良好的止血效果，它们通过影响凝血过程中的不同环节而发挥作用。肽类止血材料在体内可自然降解，无毒，生物相容性高，作用靶点明确，产业化生产相对容易且止血性能优良，在生物医学领域有很好的发展前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种HNTs/RG5纳米复合止血粉的制备方法及其应用，该方法在真空负压循环操作的情况下，克服HNTs纳米管的毛细阻力，吸附短肽RG5进入HNTs管腔，而后进行低温冷冻干燥制备快速止血粉，保证了短肽RG5的活性，HNTs/RG5纳米复合止血粉可在较低浓度时激活血小板从而发挥体外凝血作用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种HNTs/RG5纳米复合止血粉的制备方法，该方法为：

S1、将未经纯化的天然HNTs加入至超纯水a中搅拌后，加入六偏磷酸钠，磁力揽拌30min～40min，得到混合体系，静置分层后，收集上层悬浮液，在转速为9000rpm～10000rpm的条件下离心10min～20min，收集沉淀物，并用超纯水b洗涤3～4次，得到纯化HNTs，加入超纯水c重悬，并在功率为300W～400W的条件下超声处理20min～30min后，在温度为45℃～60℃的条件下干燥10h～12h，然后研磨，得到HNTs粉末；

S2、将短肽RG5溶解于PBS缓冲液中，然后加入S1中得到的HNTs粉末，在转速为150r/min的条件下上震荡混匀20min～30min后，在真空干燥机中反复抽真空两次，每次抽真空的时间为30min～40min，然后在转速为在9000rpm～10000rpm的条件下离心10min～20min后，弃去上清液，将沉淀物用超纯水d洗涤2～3次后，在低温冷冻真空干燥后，研磨得到HNTs/RG5纳米复合止血粉；所述短肽RG5具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列；所述低温冷冻真空干燥的条件为：温度为-50℃～-60℃，真空度为1.3Pa～13Pa，干燥的时间为36h～48h。

本发明中埃洛石纳米管(Halloysitenanotubes，HNTs)为硅酸盐类矿物，化学式为Al₂Si₂O₅(OH)₄·nH₂O，HNTs结构由外层的硅氧四面体和内层的铝氧八面体组合而成，自然条件下弯曲，具有中空管状结构。HNTs的管内径大约10-20nm，外径大约40-70nm，内腔负载的容积大约为4％-18％，同时管两端开口、无卷曲破裂或套管现象。HNTs的内外表面分别含有Al-OH和O-Si-O基团而导致内外表面带不同电荷，有利于其与不同带电粒子结合；同时，HNTs的中空管状结构及其较大的比表面积利于负载多种物质，如肽、小分子药物等，以减少外界环境的破坏；HNTs还具有天然形成、储量丰富、性价比高、生物相容性好等多种优点，在载药性方面具有很好的应用潜力，可以利用其中空的结构来负载某些小分子物质或者化学单体；同时，埃洛石纳米管具有良好的促凝血作用，并低浓度下(50μg/mL)就可激活血小板。