[发明专利]沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种引物对组合，本发明还公开了所述引物对组合在沿阶草种质鉴别或品种鉴定或AFLP分子指纹图谱库的构建中的应用。本发明还公开了一种沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法及其应用。本发明经过反复多次不懈的试验成功地筛选到能有效鉴别沿阶草不同种质的选择性扩增引物及引物组合，高质量的DNA指纹图谱，不但具有扩增位点多、带型质量好、分辨率高、条带疏密合适及分布均匀，易精准地检测出样本的细微差异，从而为构建沿阶草AFLP分子指纹图谱库奠定了技术基础；还通过提供的试剂方法九对引物组合等成功而有效的鉴别出30个不同种质沿阶草，为今后沿阶草种质鉴别、新品种登记、注册和产权保护等提供了科学依据。

技术领域

本发明属于植物分子育种领域，涉及一种沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法及其应用，尤其涉及到为形态上不便于鉴别的沿阶草提供一种能通过分子指纹图谱库中的遗传标记进行种质鉴别或品种鉴定及品种权保护等方面的鉴定技术。

背景技术

沿阶草又名麦冬(Ophiopogon japonicus)，属百合科沿阶草属多年生常绿草本地被或构景植物，也是传统的道地中药，被《神农本草经》列为上品滋阴、润肺清心的中药药材，是我国特有的一种重要的乡土植物，国外日本、越南、朝鲜和印度也有分布。其野生种质资源非常丰富，种类繁多；近年来民间开发利用的力度也很大，由此引起的种质混乱现象也十分严重；沿阶草种质特有的一些遗传性状如矮生性、强耐荫性及药理活性(如含有多糖和高异黄铜类化合物等活性物质)等基因资源的发掘及利用研究也逐渐得到学界业界重视。沿阶草良好地经济效益，友好地环境适应性，使其开发利用前景广阔。鉴于沿阶草的发展前景及目前的使用状况，亟待加强对其种质的鉴别筛选，品种鉴定及品种权的保护等。

生物在长期进化过程中或理化诱变剂下所产生的可遗传变异，都是由于DNA 碱基序列变异所致。同一物种内存在的极为丰富的DNA碱基序列变异，为开发和利用DNA分子标记作为遗传鉴定奠定了坚实的基础。一般狭义地分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列标记，是DNA水平上遗传多态性的直接反映。目前，以DNA水平为基础的分子标记技术包括PCR技术、RFLP技术、RAPD技术、AFLP 技术、SSR和ISSR技术、多位点小卫星DNA指纹技术和微卫星标记技术、基因芯片技术以及SNP技术等。

AFLP是一种基于RFLP和PCR基础上的遗传标记指纹图谱技术，它与上述其它方法相比，具有高度个体特异性和稳定可靠性，且以快速、灵敏、检测效率高、遗传多态性丰富等特点，大大提高了遗传分析的效率。是可以为任何来源的种质提供有力的DNA指纹，评估遗传多样性，有效地确定亲本之间的遗传差异和亲缘关系的一种十分先进的分子标记；AFLP以其检测的位点数多，保证了鉴定的高度准确性，因而被公认为是植物种质建立指纹图谱效率最高的理想标记。其技术既可以用于检测品种的质量和纯度，也可运用于稀有珍贵植物资源和名、特、优品种的鉴定、引种以及濒危植物的考察和保护工作。其高质量指纹图谱、稳定可靠的分析结果不但有利于更好地利用大量丰富的育种种质资源，更可作为新品种登记、注册和产权保护的重要依据。但到目前为止，国内外尚未发现应用AFLP分子标记技术对沿阶草种质进行分子检测、鉴别等方面的报道，更未发现利用优选出的9对AFLP引物组合构建沿阶草AFLP分子指纹图谱库方法及应用方面的报道。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供了沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法及种质鉴别，目的在于为形态上不便于鉴别的沿阶草提供一种能进行种质鉴别或品种鉴定及品种权保护等方面的应用技术。本发明通过收集到的不同地域沿阶草种质及由诱变细胞再生获得的创新种质为基础构建了沿阶草AFLP分子标记指纹图谱库；本发明的优点在于直接对沿阶草基因组DNA进行检测，不受田间环境等因素对沿阶草表型的影响；另外使用该方法可在幼苗期对不同种质(品种)进行快速准确地检测鉴定，大大缩短了检测周期。所以此项发明可应用于沿阶草不同品种或种质的鉴定、鉴别与种质资源的保护等，且对沿阶草分子育种具有重要的现实意义及应用价值。