[发明专利]一种口蹄疫病毒非结构蛋白3B优势表位缺失标记毒株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种口蹄疫病毒非结构蛋白3B优势表位缺失标记毒株，其特征在于，在非结构蛋白3B基础上发生优势表位完全缺失得到的口蹄疫病毒；

所述非结构蛋白3B基础上发生优势表位完全缺失为3B1中由GPYAGP突变为GPAAP、3B2中由GPYAGP突变为GPAAP和3B3中GPYEGP突变为GPYEAA；

优势表位缺失后的非结构蛋白3B的氨基酸序列如SEQ ID No.14所示。

2.根据权利要求1所述标记毒株，其特征在于，优势表位缺失后的非结构蛋白3B的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示。

3.根据权利要求1或2所述标记毒株，其特征在于，所述标记毒株能够在BHK-21细胞上引起致细胞病变效应；

所述标记毒株不能与3B单抗4B1发生反应；

所述标记毒株传至20代后3B蛋白的突变修饰稳定存在；

所述标记毒株复制和生长能力与未标记的亲本病毒一致。

4.权利要求1~3任意一项所述标记毒株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将含权利要求1~3任意一项所述标记毒株中优势表位缺失非结构蛋白3B的Z4片段插入pUC18载体中，得到的重组质粒用Bgl II和Not I内切酶消化，得到含突变的非结构蛋白3B的Z4片段；

Z4片段的序列如下：

GGAACTCCACGAAAAGGTGTCGAGTCACCCGATTTTTAAACAGATCTCAATCCCTTCCCAAAAGTCTGTGCTGTACTTTCTCATTGAGAAAGGGCAGCACGAAGCAGCAATCGAGTTCTTTGAGGGGATGGTTCACGATTCTATCAAGGAGGAGCTCCGACCCCTCATTCAACAGACCTCATTTGTGAAGCGCGCCTTCAAGCGCCTGAAGGAGAATTTTGAGATTGTAGCCCTGTGTTTAACCCTCTTGGCAAACATAGTGATCATGCTACGCGAAGCGCGCAAGAGGCGCCAGTCAGTGGATGACTCACTGGATGACGACGCGGCTCTTGACGATGCGGAAAAGAACCCTCTAGAGGCGAGTGGCGCCAGCGCCGTTGGTTTCAGAGAGAGATCCCCCACCGAGCAAAAGACGTGCGACGACGTGAACACTGAGCCCGTTGTGCCCGGGAGGGAACAACCGCGAGCTGAAGGACCCTACGCCGGGCCACTCGAACGTCAGAAACCTCTTAAAGTGAAAGCCAGGTTGCCACAACAAGAGGGACCTTACGCCGGTCCGATGGAGCGGCAGAAACCGCTGAAAGTGAAAGCAAAAGCCCCCGTCGTGAAGGAAGGACCCTACGAGGGGCCGGTGAAAAAGCCTGTCGCTTTGAAAGTGAGAGCAAAGAACTTGATCGTCACTGAGAGTGGAGCACCACCGACCGACTTGCAAAAGATGGTCATGGGCAACACTAAACCCGTCGAGCTCATCCTCGATGGCAAGACGGTGGCTATCTGCTGTGCTACTGGAGTGTTTGGCACTGCCTACCTCGTGCCTCGTCATCTCTTCGCAGAGAGGTATGACAAGATCATGTTGGACGGCAGAGCCTTGACAGACAGTGACTACAGAGTGTTTGAGTTTGAGATTAAAGTAAAAGGACAGGACATGCTCTCAGACGCTGCTCTCATGGTGTTACACCGTGGGAACCGCGTGCGAGATATCACGAAGCATTTTCGCGATGTAGCGAGAATGAAGAAGGGAACCCCCGTCGTCGGCGTGATCAACAACGCTGATGTCGGGAGACTCATATTCTCTGGTGAAGCCCTCACTTACAAGGACATTGTCGTGTGCATGGACGGAGACACCATGCCTGGGCTCTTTGCCTACAGAGCTTCCACCAAGGCGGGCTACTGTGGAGGAGCCGTCCTGGCAAAAGACGGGGCCGAGACGTTCATCGTCGGCACCCACTCTGCAGGTGGCAACGGTGTGGGATATTGTTCATGCGTTTCCCGCTCAATGCTTCTGAAAATGAAGGCACACATCGATCCCGAACCACACCACGAGGGGTTGATTGTCGACACCAGAGACGTGGAAGAGCGCGTGCACGTGATGCGCAAAACCAAGCTCGCGCCCACCGTAGCGCACGGTGTGTTCAACCCCGAATTCGGGCCTGCCGCTCTGTCCAACAAGGACCCACGCCTGAATGAGGGGGTTGTCCTCGACGATGTCATTTTCTCCAAACACAAAGGAGACACAAAGATGTCTGAAGAGGACAAAGTGCTGTTCCGGCGCTGTGCTGCTGACTACGCGTCACGCTTACACAGCGTGTTGGGGACGGCAAATGCCCCACTGAGCATTTACGAGGCTATCAAAGGCGTCGACGGACTCGACGCCATGGAACCGGATACCGCGCCCGGTCTCCCCTGGGCTCTCCAGGGGAAACGCCGCGGTGCCCTGATCGACTTTGAAAACGGCACCGTCGGGCCCGAGGTCGAGGCAGCCCTCAAGCTCATGGAGAGACGTGAGTACAAGTTCGTCTGCCAGACCTTCCTGAAGGACGAGATTCGCCCGCTGGAGAAGGTGCGCGCTGGCAAGACACGCATTGTCGACGTCCTGCCTGTTGAACACATCCTCTACACCAGGATGATGATTGGTAGATTCTGCGCCCAAATGCACTCAAACAACGGACCGCAAATTGGCTCGGCGGTCGGTTGCAACCCTGACGTTGATTGGCAAAGATTTGGCACACATTTCGCCCAGTACAAAAACGTGTGGGATGTGGACTATTCGGCCTTTGATGCTAACCACTGCAGTGATGCGATGAACATCATGTTCGAGGAGGTGTTCCGCACGGAGTTTGGCTTCCACCCGAACGCCGAGTGGATTCTGAAGACTCTAGTGAACACGGAGCACGCCTATGAGAACAAGCGTATCACCGTCGAGGGTGGAATGCCATCTGGTTGTTCCGCAACAAGCATTATCAACACAATTTTGAACAACATCTACGTGCTCTACGCCCTGCGCAGACACTATGAGGGAGTCGAGCTGGACACTTACACCATGATCTCCTACGGAGACGACATCGTGGTGGCGAGTGATTACGACCTGGACTTTGAGGCCCTTAAGCCTCACTTCAAGTCCCTTGGTCAAACCATTACTCCAGCCGACAAAAGCGACAAAGGTTTTGTTCTTGGTCACTCCATTACCGATGTCACTTTCCTCAAAAGACACTTCCACATGGATTACGGAACTGGGTTTTACAAACCTGTGATGGCCTCGAAGACCCTCGAGGCCATCCTCTCCTTTGCACGCCGTGGGACCATACAGGAGAAGTTGATCTCCGTGGCAGGACTCGCCGTCCATTCTGGACCCGACGAGTACCGGCGTCTCTTTGAGCCCTTCCAAGGCCTCTTTGAGATTCCAAGCTACAGATCACTTTACCTGCGTTGGGTGAACGCCGTGTGCGGTGACGCATAATCCCTCAGATGTCACTACTGGCAAAAAGACCCTGAGGCGCGCGACGCCGTAGGAGTGAAAAACCGCAAAGGTTTTTCCCACTTCCTATTTCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA；

2）将所述含突变的非结构蛋白3B的Z4片段插入口蹄疫疫苗株全长感染性克隆中，得到全长重组质粒；

3）将所述全长重组质粒线性化后转染细胞，得到的拯救病毒为口蹄疫病毒非结构蛋白3B优势表位缺失标记毒株。