[发明专利]一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①使用脐带间充质干细胞培养基对间充质干细胞进行培养；

②分别收集细胞和间充质干细胞条件培养液；

或培养瓶预铺生物材料，使细胞粘附生长于生物材料表面，然后分别收集含有细胞的生物材料和间充质干细胞条件培养液；

③检测细胞数量和条件培养液蛋白浓度，同时进行细菌和病毒、内毒素检测；

④在条件培养液中加入核苷酸化合物，并进行冷冻干燥；

⑤得到间充质干细胞活性因子复合物冻干品，分装保存。

2.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，所述的使用脐带间充质干细胞培养基对间充质干细胞进行培养，包括原代培养和传代培养，以获得更多的细胞条件培养液；所述的条件培养液的收集，优选传代3-10代的细胞培养所得。

3.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，所述的条件培养液的收集，优选细胞融合度60％-80％时间内培养两天的培养液。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，所述条件培养液包含人源生长因子。

5.根据权利要求4所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，所述人源生长因子包括：内皮生长因子(VEGF)、成纤维生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF)、胶原、胰岛素生长因子(IGF-1)。

6.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，所述的加入核苷酸化合物进行冷冻干燥，包括以下步骤：加入核苷酸类化合物，在-80℃的条件下预冻4小时，然后在真空条件下冻干，冷阱温度为-80℃，样品温度由-80℃升温到20±5℃，含水量为3％-20％。

7.根据权利要求6所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，所述核苷酸类化合物包括烟酰胺单核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸锂、钠、钾盐的一种或几种；所述核苷酸类化合物加入比例为5-50％。

8.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，其特征在于，所述的冻干品，含有质量浓度为110-500ppm的人脐带来源间充质干细胞分泌的完整谱系的活性因子。

9.一种间充质干细胞，其特征在于，根据权利要求1-8任一项所述的一种间充质干细胞及其活性因子复合物冻干品的制备方法，收集细胞后冷冻得到。

10.一种根据权利要求1-8任一项所述的方法制备的间充质干细胞活性因子复合物冻干品。