[发明专利]PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型及其建立方法和应用

说明书

本发明属于家畜流行病领域，涉及猪流行性腹泻病毒（PEDV）与猪δ冠状病毒（PDCoV），特别是指PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型及其建立方法和应用。建立方法步骤如下：PDCoV和PEDV毒株的选择；选用5日龄健康仔猪，通过口服途径接种PDCoV毒株和PEDV毒株细胞的混合液；攻毒后每天测量体重、观察临床症状、并通过荧光定量PCR方法分别检测粪便排毒情况和小肠组织中的病毒载量并进行综合评价，建立PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型。本申请成功建立了PDCoV和PEDV共感染仔猪模型，为后续PDCoV与PEDV协同致病机理研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于家畜流行病领域，涉及猪δ冠状病毒（PDCoV）与猪流行性腹泻病毒（PEDV），特别是指PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型及其建立方法和应用。

背景技术

猪流行性腹泻病毒（PEDV）可引起仔猪的水样腹泻、呕吐、脱水等临床症状，是引起猪腹泻的重要病原体之一。猪δ冠状病毒（PDCoV）属于δ冠状病毒属，是近年来新被发现的猪肠道冠状病毒，临床上可引起仔猪腹泻、呕吐、脱水等症状。

近年来，中国多省的生猪养殖产业因仔猪死亡而造成的经济损失巨大，经调查显示，大多是因腹泻性病原导致的。有报告显示，近年来我国猪群中存在PDCoV和PEDV共感染现象。Dong等人在对2004~2014年四个不同地区的病料检测中发现PDCoV与PEDV共感染率高达50%。Zhang等人在2015年4月至2018年3月对河南省部分地区采集的430份样品进行检测，发现混合感染率为60.04%。说明PEDV和PDCoV是普遍存在于腹泻猪群中的病毒，是引起仔猪腹泻的重要原因。由于PEDV和PDCoV引起的临床症状十分相似，流行病学和病理变化无明显差别。为了避免误诊，耽误最佳治疗时间，尽管已有研究证明PDCoV和PEDV存在混合感染，但由于PDCoV是近年来新发现的病毒，关于PDCoV与其它病原混合感染的致病性及致病机制都没有进行深入的探究。

发明内容

本发明提出一种PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型及其建立方法和应用，解决了PDCoV和PEDV这两种病毒的协同致病性状，本申请采用5日龄易感商品仔猪，人工感染PEDVCV777弱毒株和PDCoV-HNZK-02毒株，成功建立了PDCoV和PEDV共感染仔猪模型，为后续PDCoV与PEDV协同致病机理研究奠定了基础。

本发明的技术方案是这样实现的：

PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型的建立方法，步骤如下：

（1）PDCoV和PEDV毒株的选择；

（2）选用5日龄健康仔猪，通过口服途径接种PDCoV毒株和PEDV毒株细胞的混合液；

（3）攻毒后每天测量体重、观察临床症状、并通过荧光定量PCR方法分别检测粪便排毒情况和小肠组织中的病毒载量并进行综合评价，建立PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型。

所述步骤（1）中PDCoV毒株为PDCoV-HNZK-02毒株，滴度为1×10⁷ TCID₅₀/mL；PEDV毒株为PEDV CV777弱毒株，滴度为2×10⁷ TCID₅₀/mL。

所述步骤（2）中混合液中PDCoV毒株和PEDV毒株细胞的体积均为5mL。

所述步骤（3）中检测PEDV毒株的上游引物序列为5’-CGCAAAGACTGAACCCACTAATTT-3’，下游引物序列为：5’-TTGCCTCTGTTGTTACTTGGAGAT-3’；检测PDCoV毒株的上游引物序列为5’- CGTTAACCTCTTCTCACCACTT-3’，下游引物序列为：5’-GCTGAGAGTCTGGTTGGTTATT-3’。

上述方式所建立的PDCoV和PEDV共感染仔猪发病模型。