[发明专利]牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用

说明书

本发明公开了一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用。所述制备方法包括：在电极表面依次修饰rGO‑Au复合纳米粒子、戊二醛、模板分子，获得模板分子修饰的电极，其中，所述模板分子为牛奶淀粉样蛋白；以及，以吡咯为功能单体，采用循环伏安法在所述模板分子修饰的电极表面电聚合形成聚吡咯分子印迹膜，之后去除模板分子从而制得牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。本发明制备的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器检测MAA的方法较现有的ELISA方法更加快速、简便、灵敏，并且本发明在奶牛乳腺炎尤其是亚临床乳腺炎的检测和预防方面具有重要意义，实用性强。

技术领域

本发明属于分子印迹电化学检测技术领域，具体涉及一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用。

背景技术

牛乳腺炎(Bovine mastitis)是一种影响奶牛健康的主要疾病，乳腺炎导致牛奶产量减少、治疗开支负担加重。亚临床乳腺炎(SM)是一种缺乏全身或局部炎症迹象的疾病，亚临床乳腺炎通常通过诸如加利福尼亚乳腺炎测试(CMT)、通过对SCC的实验室分析或乳汁病原微生物检测法来诊断。急性期反应期蛋白(Acute phase protein,APP)是在压力、外伤、感染或炎症等刺激激发动物机体产生早期蛋白，血清淀粉样蛋白A(SAA)、触珠蛋白(HP)、C反应蛋白(CRP)、铜蓝蛋白等是常见的APP，人类医学中，APP在炎症性疾病的诊断和预后中已被使用了很长一段时间，它们的测定已成为兽医学中的重要诊断工具，部分APP已经成功应用到商业检测。

在奶牛中，最主要的APP是SAA和Hp,血清淀粉样蛋白A是一种具有多种蛋白质种类的APP，主要在肝脏遭受急性刺激是产生的反应，它的主要同种型SAA1，SAA2和SAA3，SAA1和SAA2主要在肝脏中产生，而SAA3在肝外部位产生，且主要在牛奶中发现，被称为乳腺相关淀粉样蛋白A(M-SAA3)。血清淀粉样蛋白A(SAA)和M-SAA3一起被称为牛奶淀粉样蛋白A(MAA)，可使用市售ELISA在牛奶样品中进行测量，目前研究发现，在奶牛发生隐性乳腺炎期间，奶牛乳中MAA含量显著升高，已经提出牛奶中这种蛋白质的水平作为奶牛乳腺炎感染的敏感指标。

目前检测MAA浓度的方法据报道只有ELISA试剂盒法，ELISA检测准确度高，但是费用昂贵、检测时间长以及容易产生非特异性结果等都是ELISA法检测现有的缺点。电化学传感器是一种基于待测物的电化学性质并将其与待测物之间相互作用的化学能转变成可记录的电信号，从而实现对被测物分析检测的器件。作为天然分子识别元件的替代方法，分子印迹聚合物(MIP)受到国内外越来越多科研人员的青睐。基于MIP的电化学传感器具有MIP和电化学传感器的优点，包括仪器简单，价格低廉，信号定量容易，快速等优点，已广泛应用于各种物质的检测，例如金属离子，小分子和蛋白质。采用分子印迹电化学传感器法检测MAA并应用于实际牛奶检测国内外未见报道。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器及其制法与应用，以克服现有技术的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器的制备方法，其包括：

提供电极；

在电极表面依次修饰rGO-Au复合纳米粒子、戊二醛(GA)、模板分子，获得模板分子修饰的电极，其中，所述模板分子为牛奶淀粉样蛋白(MAA)；

以及，以吡咯为功能单体，采用循环伏安法在所述模板分子修饰的电极表面电聚合形成聚吡咯分子印迹膜，之后去除模板分子从而制得牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。

本发明实施例还提供了由前述方法制备的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器。

本发明实施例还提供了前述的牛奶淀粉样蛋白分子印迹电化学传感器于检测牛奶淀粉样蛋白中的应用。