[发明专利]用于靶向测序的通用杂交增强剂及方法

说明书

本发明公开用于靶向测序的通用杂交增强剂及方法。本发明的杂交增强剂能够高效封闭接头序列，且不受接头序列中Index的影响，操作简便，封闭效率高，能够有效降低背景信号，提升有效数据量，减少测序成本。

技术领域

本发明涉及基因测序领域，具体地涉及用于靶向测序的通用杂交增强剂及靶向测序方法。

背景技术

在高通量测序领域，杂交捕获技术是利用核酸分子之间互补配对原理，通过带有生物素修饰的探针分子高效富集感兴趣的目标区域，从而减少非目标区域数据占比，提高数据有效率，是一种实用性高、成本较低的靶向测序技术。目前，杂交捕获技术已经广泛应用于临床诊断，例如肿瘤用药的伴随诊断，遗传病辅助诊断等。

对于人类基因相关的杂交捕获，探针与文库(也称为预文库)的杂交反应包括以下组分，探针、文库、Human Cot1 DNA和杂交增强剂。其中，探针是与文库中的目标序列结合，靶向富集含有目标序列的文库；Human Cot1DNA用于封闭文库序列中重复序列，减少背景信号；由于文库中含有相同的接头序列，文库与文库之间会通过接头序列的互补配对发生串联反应，导致背景信号增加，目标序列占比降低。因此，杂交增强剂的作用在于封闭文库中的接头序列，阻断文库之间的串联反应发生，提高数据利用率。

杂交捕获技术可以一次完成对几百万碱基的基因组区间的检测，通量非常高，结合高通量测序仪，可以一次完成多个样本的检测。但是为了区分不同的样本，每个样本的文库都具有特定的标签(Index)，以便高通量测序仪进行识别。在杂交反应时，需要加入与Index对应的杂交增强剂。例如，对带有12种Index的12个文库进行杂交捕获就需要12种杂交增强剂，操作较为繁琐，流程不流畅，也不利于自动化平台的建立。因此，迫切需要一种通用杂交增强剂，该杂交增强剂能够兼容不同的Index，在杂交反应时，无论Index的多与少，都只需要一种通用杂交增强剂。

发明内容

针对现有技术中的至少部分技术问题，本发明开发了一种用于杂交捕获的通用杂交增强剂，该杂交增强剂能够高效封闭接头序列，且不受接头序列中Index的影响，操作简便，封闭效率高，能够有效降低背景信号，提升有效数据量，减少测序成本。

本发明的第一方面，提供一种用于靶向测序的通用杂交增强剂，其中，所述通用杂交增强剂能够与文库中至少一个核酸片段的两个末端结合，从而形成环状结构，所述通用杂交增强剂包括第一结合部或其互补序列、第二结合部或其互补序列和第三结合部或其互补序列，当文库中核酸片段的正链沿5’端至3’方向依次包括第一接头、插入片段和第二接头，且第一接头沿5’端至3’方向依次包括序列A和序列B，第二接头沿5’端至3’方向依次包括序列C和序列D时，所述第一结合部能够同时与序列A或其部分连续序列和序列D或其部分连续序列互补结合，所述第二结合部能够与序列B或其部分连续序列互补结合，所述第三结合部能够与序列C或其部分连续序列互补结合。

根据本发明所述的用于靶向测序的通用杂交增强剂，优选地，所述第一结合部、所述第二结合部和所述第三结合部中的至少之一包含核苷酸类似物。

根据本发明所述的用于靶向测序的通用杂交增强剂，优选地，所述核苷酸类似物选自LNA、BNA和MGB组成的组中的至少一种。

根据本发明所述的用于靶向测序的通用杂交增强剂，优选地，所述第一结合部与所述第二结合部之间或所述第一结合部与所述第三结合部之间通过共价键或连接子连接；或者所述第一结合部与所述第二结合部之间和所述第一结合部与所述第三结合部之间各自通过共价键或连接子连接。

根据本发明所述的用于靶向测序的通用杂交增强剂，优选地，所述共价键包括磷酸二酯键，所述连接子包括C3间隔臂。

根据本发明所述的用于靶向测序的通用杂交增强剂，优选地，所述通用杂交增强剂的Tm值在70-90℃。

根据本发明所述的用于靶向测序的通用杂交增强剂，优选地，所述通用杂交增强剂的3’末端含有封闭修饰。