[发明专利]蛋白质PfuPGM作为葡萄糖磷酸变位酶在生产肌醇中的应用有效
| 申请号： | 202010900206.5 | 申请日： | 2020-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN111763696B | 公开（公告）日： | 2021-02-05 |
| 发明（设计）人： | 游淳;韩平平 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N9/90 | 分类号： | C12N9/90;C12P7/18;C12N15/61;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 闫书宁 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋白质 pfupgm 作为 葡萄糖 磷酸 变位 生产 中的 应用 | ||
1.一种生产肌醇的方法，包括如下步骤：
h制备反应体系1；反应体系1中含有30-50mM pH7.0的磷酸缓冲液、4-6mM的二价镁离子、0.8-1.2U/ml的葡聚糖磷酸化酶、0.8-1.2U/ml的蛋白质PfuPGM、0.8-1.2U/ml的肌醇3磷酸合成酶、0.8-1.2U/ml的肌醇单磷酸酶和90-110g/L的可溶性淀粉；
所述蛋白质PfuPGM为如下e或f或g：
e氨基酸序列是SEQ ID NO：1所示的蛋白质；
f氨基酸序列是SEQ ID NO：3所示的蛋白质；
g在SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
i取反应体系1，65-75℃反应12h以上，得到反应产物1；
j从反应产物1中分离肌醇。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应体系1中还含有异淀粉酶；异淀粉酶在反应体系1中的浓度为0.8-1.2U/ml。
3.一种生产肌醇的方法，包括如下步骤：
o制备反应体系2；反应体系2中含有8-12mM pH7.0磷酸缓冲液、4-6mM的二价镁离子、0.12-0.16g DCW/L的表达葡聚糖磷酸化酶的细胞、0.06-0.10g DCW/L表达蛋白质PfuPGM的细胞、0.4-0.6g DCW/L表达肌醇3磷酸合成酶的细胞、0.06-0.10g DCW/L表达肌醇单磷酸酶的细胞和90-110g/L的可溶性淀粉；
所述蛋白质PfuPGM为如下e或f或g：
e氨基酸序列是SEQ ID NO：1所示的蛋白质；
f氨基酸序列是SEQ ID NO：3所示的蛋白质；
g在SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
p取反应体系2，65-75℃反应12h以上，得到反应产物2；
q从反应产物2中分离肌醇。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述反应体系2中还含有表达异淀粉酶的细胞。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：反应体系2中含有8-12mM pH7.0的磷酸缓冲液、4-6mM的二价镁离子、0.12-0.16g DCW/L的表达葡聚糖磷酸化酶的细胞、0.06-0.10gDCW/L表达蛋白质PfuPGM的细胞、0.4-0.6g DCW/L表达肌醇3磷酸合成酶的细胞、0.06-0.10g DCW/L表达肌醇单磷酸酶的细胞、0.06-0.10g DCW/L表达异淀粉酶的细胞和90-110g/L的可溶性淀粉。
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