[发明专利]IL7R基因人源化改造的动物模型的构建方法及其应用

说明书

本发明提供了一种IL7R基因人源化改造的动物模型的构建方法、一种人源化IL7R蛋白、一种人源化IL7R基因、一种IL7R基因的靶向载体和其在生物医药领域的应用，利用同源重组的方式将部分编码人IL7R蛋白的核苷酸序列导入非人动物基因组中，该动物模型体内能正常表达人源化IL7R蛋白，可以用于人IL7R信号机理研究、肿瘤及免疫相关疾病药物筛选，对免疫靶点的新药研发具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及一种IL7R基因人源化改造的动物模型的构建方法和在生物医药领域的应用。

背景技术

白细胞介素7受体(interleukin 7receptor,IL7R)属于Ⅰ型细胞因子受体家族成员的跨膜受体，由α链(IL7Rα，CD127)和γ链(γc，CD132)组成，α链是IL7R的特异性组分；γ链是IL2、IL4、IL7、IL9、IL15、IL21等细胞因子受体的共同组分，也被称为共有γ链，是启动IL7R下游信号表达的必需成分。生理情况下，IL7R是淋巴细胞增殖和分化的必需关键因子，IL7R在细胞表面缺失会导致B系和T系淋巴细胞生成障碍；病理情况下，IL7R功能缺陷可导致重症联合免疫缺陷病，而IL7R获得性突变可引起急性T淋巴细胞白血病等。

IL7R主要在淋巴前体细胞、B祖细胞、T细胞、胸腺细胞、髓样细胞及单核细胞表达。此外，IL7R还在多种肿瘤组织、自身免疫性疾病及其进展过程中异常表达。已有研究表明干预IL7R的信号会影响和预防急性T淋巴细胞白血病复发。小鼠实验表明施用IL-7R抗体可缓解II型胶原诱导性关节炎模型（CIA）的临床症状，减轻关节炎性细胞浸润以及骨和软骨的破坏，这为IL-7R作为治疗新靶点提供了支持。

实验动物疾病模型对于研究人类疾病发病机制、开发防治技术及药物是不可缺少的研究工具。由于人IL7R序列与啮齿类动物中的对应蛋白存在显著差异，如人IL7R和小鼠IL7R蛋白序列的一致性仅为64％，识别人IL7R蛋白的抗体通常无法识别小鼠IL7R，即无法用普通小鼠来筛选和评价靶向IL7R药物的药效。鉴于IL7R相关药物全球研发进展及靶向该信号通路的巨大应用价值，为了使临床前期试验更有效并使研发失败率最小化，本领域急需开发人源化IL7R相关的非人动物模型，然而，由于动物与人类在生理学及病理学方面存在差异，加上基因（即遗传因子）的复杂性，如何能构建出“有效”的人源化动物模型用于新药研发仍是最大的挑战。

发明内容

本发明的第一方面，提供了一种IL7R基因人源化改造的动物模型的构建方法，所述的动物模型的基因组中包括编码SEQ ID NO.2第1至239位氨基酸的核苷酸序列。

进一步优选的，所述的动物模型的基因组中包括NCBI登录号为NC_000005.10的第35856978-35874459 位核苷酸序列。

优选的，所述的动物模型的基因组中包含人IL7R核苷酸序列的1号外显子的部分、2号至5号外显子的全部和6号外显子的部分，进一步优选的，包含1-2号内含子和/或5-6号内含子，更优选的，包含1-6号外显子之间的任一内含子；其中，所述人IL7R核苷酸序列的1号外显子的部分至少包含从编码信号肽的核苷酸序列开始至1号外显子最后1个核苷酸序列为止，6号外显子的部分至少包含从6号外显子第一个核苷酸开始至编码胞外区的最后一个核苷酸序列为止。

优选的，所述的构建方法包括插入、翻转、敲除或替换。优选为原位替换。