[发明专利]腺相关病毒介导的新型冠状病毒抗体诱导物及疫苗组合物

说明书

本发明提供一种基于腺相关病毒的新型冠状病毒的抗体诱导物，其能够在体内诱导产生针对新型冠状病毒的抗体，以及提供包含该抗体诱导物的病毒载体及疫苗组合物。

技术领域

本发明涉及利用腺相关病毒等病毒载体制备的新型冠状病毒抗体诱导物，其可在哺乳动物体内表达新型冠状病毒的部分抗原序列，从而使生物体对新型冠状病毒产生抗体。

背景技术

生物体对于外源异物，如病毒、蛋白等会产生免疫反应，从而产生针对特定蛋白序列或部分序列的抗体，抗体进一步结合抗原物质沉降从而代谢消耗，保护机体免受该类物质对机体的伤害。利用这一原理，可以使用各种灭活病毒或是病毒的部分组成部分等制备疫苗。

目前主要疫苗的种类包括：灭活病毒疫苗、重组蛋白疫苗、RNA疫苗、腺病毒疫苗等。

新型冠状病毒(Coronavirus)SARS-CoV-2为在全球范围内迅速爆发的RNA病毒，隐匿性和传染性很强，除引起无症状感染以外，还可引起病毒性肺炎、严重呼吸综合征、肾衰竭，已造成大量死亡。目前对其的防控主要在于以隔离消毒等控制向未感染人群的传播，尚无成熟有效而安全的新型冠状病毒预防性疫苗。

目前处于研发中的新型冠状病毒疫苗存在其各自的弊端。

灭活病毒疫苗使用直接灭活的新型冠状病毒作为抗原对人体进行免疫，从而产生抗体，效果最为直接，有效性较高，但是在灭活疫苗的生产过程中的技术难度大，活病毒大规模制备要求高、难度大、安全性缺乏保障，存在有病毒未完全灭活以及环境泄露的风险。

重组蛋白疫苗需要辅助使用佐剂激活人体的免疫应答，而佐剂的选择对疫苗副作用的产生具有较大影响，同时由于蛋白质稳定性的问题，生物体无法长期持续性产生抗体。

而对于RNA疫苗而言，其机理为通过修饰抗原决定簇的编码mRNA使得其不具备较强的炎症激活能力，通过被细胞吸收，从而在宿主细胞内表达出抗原决定簇，使得免疫系统识别该宿主细胞产生细胞免疫，从而杀灭病毒。但RNA疫苗载体本身具有一定的免疫原性，外源性核酸感染细胞时会导致炎症活化，从而使得大量RNA被降解。

而腺病毒疫苗的问题在于，由于人体对腺病毒的免疫反应强烈，会伴随大量副作用的产生，甚至死亡案例出现，通过参考上世纪90年代基因治疗导致杰西卡死亡的案例可知，存在着极大的风险。

重组型腺相关病毒(adeno-associated virus)是一类非整合性的单链线性DNA病毒，其存在DNA不整合以及无法复制的特性，在哺乳动物上使用十分安全。目前美国以及欧洲均已批准腺相关病毒的临床药物上市，有大量临床案例辅助证实了其安全性。但目前较少有基于重组型腺相关病毒制备的有效新型冠状病毒疫苗、及其作用机制的报道。

发明内容

本发明人通过将新型冠状病毒SARS-CoV-2的受体结合结构域(receptor bindingdomain,RBD)进行序列选择及改造后，采用基因工程手段载入病毒载体如腺相关病毒载体中，并使用其作为抗体诱导物感染哺乳动物，从而在哺乳动物的肌肉细胞中表达新型冠状病毒特征蛋白，诱导机体产生针对新型冠状病毒的抗体，激活免疫应答，从而实现了本发明。

本发明的抗体诱导物感染哺乳动物细胞后，在该生物体细胞中表达新型冠状病毒的受体结合结构域RBD的部分蛋白序列，并释放至该生物体内引起免疫应答反应，产生对新型冠状病毒的特异性抗体，保护机体免受新型冠状病毒的感染。

本发明的抗体诱导物具有以下特点：本发明的抗体诱导物包含的作为抗原的RBD序列(SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，或编码SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列)，为新型冠状病毒的刺突蛋白三聚体立体结构(图9)中的一个完整的RBD和一个由β折叠组成的小结构域(图中所有区域)，两者互作紧密，不可分开。因此，本发明人推测，通过使用这样的序列，与只包含RBD区域的序列相比，编码形成的蛋白的整体将更加稳定，具有更好的抗原免疫性，从而更好地诱导新型冠状病毒的抗体产生。