[发明专利]沙融山羊草7Ssh

权利要求书

1.一种沙融山羊草7S^sh染色体特异分子标记引物组合的应用，其特征在于：使用沙融山羊草7S^sh染色体特异分子标记引物组合进行PCR扩增，对小麦背景中是否含有沙融山羊草7S^sh染色体进行检测或辅助检测；

所述的分子标记引物组合为下列四对引物组合，其碱基序列如下：

TNAC1867-PLUG:

F：5’-GCCTTTCCTTTGGTAGTCTGG-3’,编号为SEQ ID NO.1；

R：5’-CGATCCAAATGATCCTGAAGA-3’,编号为SEQ ID NO.2；

TNAC1924-PLUG：

F：5’-TAGCTTTGGAACGATGTGTGG-3’，编号为SEQ ID NO.3,

R：5’-TGTGGAGCAGTGCTGTTTATG-3’,编号为SEQ ID NO.4；

TNAC1902-PLUG：

F：5’-AATACCAGGTCCTCCAACTTT-3’，编号为SEQ ID NO.5,

R：5’-TGGAATCGCTGAGAAAGAATG-3’,编号为SEQ ID NO.6；

TNAC1806-PLUG：

F：5’-ATTCCTCGTGAATTGCTGGAT-3’,编号为SEQ ID NO.7，

R：5’-TCTGCAGTTAGGGACTTGAAA-3’,编号为SEQ ID NO.8。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的检测或辅助检测的步骤如下：

a)以待测的可能含有沙融山羊草7S^sh染色体的小麦背景系的基因组总DNA为模板，用沙融山羊草7S^sh染色体特异分子标记引物组合分别对其进行PCR扩增，扩增产物使用凝胶电泳进行检测；

b)如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中含有与阳性对照相同的特异DNA条带而阴性对照无该带，则说明待测小麦背景系的基因组中含有沙融山羊草7S^sh染色体；如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中不含有与对照相同的特异多态性DNA条带，则说明待测小麦背景系的基因组中不含有沙融山羊草7S^sh染色体。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(b)中所述的阳性对照为中国春－沙融山羊草双二倍体；所述的阴性对照为中国春小麦。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(a)中所述的PCR扩增特征在于，30μLPCR反应体系为：25ng/μL的模板DNA 2.0μL，5U/μL Taq DNA polymerase 0.3μL，200μM的dNTPs，含Mg²⁺的10×PCR buffer 3.0μL，10μM的上、下游引物各2μL，用无菌双蒸馏水补充反应体系至30μL；

所述的PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min，随后35个循环：94℃变性45s，57℃退火45s，72℃延伸2min，最后72℃延伸10min，4℃保存。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(a)中所述的PCR扩增的程序还包括利用限制性内切酶酶切，具体为引物TNAC1902和TNAC1806的扩增产物使用限制性内切酶TaqI进行酶切。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于步骤(a)中使用2％琼脂糖凝胶电泳进行检测。