[发明专利]一种共培养体的建立方法及建立得到共培养体及其应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其是涉及一种共培养体的建立方法及建立得到共培养体及其应用。本发明的共培养体的建立方法至少包括以下步骤：培养得到树突细胞或树突细胞的外泌体；培养得到肠道类器官；在培养有肠道类器官的孔板上放置transwell小室，将树突细胞的悬液或树突细胞的外泌体加入到transwell小室的上室内进行共培养，建立得到共培养体。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其是涉及一种共培养体的建立方法及建立得到共培养体及其应用。

背景技术

为了建立更类似于体内环境的培养体系，尽可能使体外环境与体内环境相吻合，从而使细胞间能相互沟通信息，相互支撑生长增殖，人们在细胞培养技术的基础上发展出了细胞共培养技术。细胞共培养技术是将2种或2种以上的细胞共同培养于同一环境中，具有更好地反映体内环境的优点。共培养体系主要作用：诱导细胞向另一种细胞分化；诱导细胞自身分化；维持细胞功能和活力；调控细胞增殖；促进早期胚胎发育和提高代谢产物产量。

健康肠道的功能依赖于完整的屏障功能，而屏障功能是建立在正常的肠道干细胞分化增殖及时补充受损的肠道上皮细胞的。肠炎发生时，肠道免疫稳态被打破，免疫细胞功能异常，表现为树突细胞的过度活化，引发免疫激化。故研究树突细胞对于肠道干细胞的影响作用非常重要。但关于树突细胞对肠道干细胞分化的作用还未见报道，目前在缺乏可应用于研究的细胞体系。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种共培养体的建立方法，该建立方法能够建立得到树突细胞与肠道类器官的共培养体。

本发明的第二目的在于提供一种建立得到共培养体。

本发明的第三目的在于提供的该共培养体的应用。

为了完成上述发明目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种共培养体的建立方法，至少包括以下步骤，

S1、培养得到树突细胞或树突细胞的外泌体；

S2、培养得到肠道类器官；

S3、在培养有肠道类器官的孔板上放置transwell小室，将所述树突细胞的悬液或树突细胞的外泌体加入到所述transwell小室的上室内进行共培养，建立得到所述共培养体；

优选的，所述树突细胞数目与所述肠道类器官数目之比为40～80：1，更优选为40～60：1。

可选的，所述肠道类器官为小肠类器官。

可选的，在所述共培养过程中，通过肠道类器官球形结构形成率、肠道类器官结构形成率和类器官演化率评价肠道类器官的生长。

可选的，所述S1至少包括以下步骤：

S11、取骨髓细胞，加入红细胞裂解液，裂解后离心；

S12、加入含有粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白介素4的完全RPMI1640培养基重悬细胞，铺至细菌培养皿中进行培养；

S13、分别于第3、6、8天，加入新的含有粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白介素4的完全RPMI1640培养基重悬细胞；

S14、第10天收集悬浮细胞，此时为未成熟的树突细胞；

S15、将所述未成熟的树突细胞离心，用完全RPMI1640培养基重悬细胞，加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和脂多糖培养2天，获得所述树突细胞。

可选的，所述含有粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白介素4的完全RPMI1640培养基中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的浓度为10～30ng/mL，优选20ng/mL；白介素4的浓度为10～30ng/mL，优选20ng/mL；