[发明专利]一种牦牛曲拉中乳酸菌的分离方法

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种牦牛曲拉中乳酸菌的分离方法。具体通过样品收集、表面消毒、冲洗、预培养、乳酸菌分离、乳酸菌鉴定及保藏七个步骤实现。本发明一种牦牛曲拉中乳酸菌的分离方法，牦牛曲拉采用预处理方法处理后，更有利于从中分离乳酸菌，处理后乳酸菌的分离具有效率高、杂菌污染少、步骤简单、成本低等优点。本发明方法分离所得的乳酸菌可应用于乳制品生产，基于上述优点，本发明可产生较好的社会及经济效益，市场前景广阔。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种牦牛曲拉中乳酸菌的分离方法。

背景技术

牛曲拉，又称奶渣，是将牦牛乳脱脂后，在自然条件下进行发酵使酪蛋白凝结、干燥后制成的一种发酵乳制品。曲拉中蛋白含量高于以普通牛乳制作的干酪。与新鲜牦牛乳相比较，曲拉具有蛋白质含量较高、易贮藏、方便运输的特点。曲拉不仅是藏区牧民储藏食品蛋白的重要手段，而且也是制作酸奶的发酵剂。

不同地域曲拉的制作方式存在很大的差异，并且同一地域的不同牧民家庭因制作习惯不同也不尽相同。曲拉的品质及风味与其制作方式关系密切，其主要由脱脂方式、制作所用的发酵剂及环境条件所控制，这些因素直接决定了曲拉的品质及滋气味。随着藏区牧民家庭脱脂技术的逐渐提高，采用电动式脱脂机已能够满足脱脂要求；到目前为止，牧民制作曲拉时依旧选择沿用传统的添加乳清液的方式作为发酵剂，因其中本身含有异常复杂的微生物，因此，曲拉的制作过程中除乳酸菌外还有多种微生物参与了发酵过程。

曲拉的发酵过程属于自然发酵，因无法精确控制发酵温度，在这种开放环境下适宜多种微生物生长繁殖，因此，曲拉具有复杂的微生态体系；另外，曲拉制作采用粗放的生产方式，尤其是在后期的晾晒中，牧民选择直接在地面铺开通过暴晒风干，这使得曲拉易被环境中的一些杂质如灰尘等污染，同时，在晾晒时环境中的微生物也会在曲拉表面聚集，因而造成一定的微生物污染。另外，由于曲拉水分含量较低、蛋白含量高，其中的微生物被包裹在蛋白质内部，采用普通方法进行分离时样品很难溶解，因而会影响内部乳酸菌的分离效率。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的提供一种牦牛曲拉中乳酸菌的分离方法。

本发明一种牦牛曲拉中乳酸菌的分离方法的技术方案：具体包括如下步骤：

步骤一，样品收集：从牧区或周边市场收集牦牛曲拉样品，收集时检查是否有霉变或虫蛀的牦牛曲拉；

步骤二，表面消毒：称取牦牛曲拉样品，按照料液比1:10的比例，加入装有体积分数75％酒精的无菌离心管中浸泡30～50s，4000rpm离心，去除上清液，再加入与酒精相同量，质量分数15％的过氧化氢，灭菌15～20min，4000rpm离心取沉淀；

步骤三，冲洗：将表面消毒后的牦牛曲拉用无菌水冲洗4～5次，然后用0.9％的无菌生理盐水浸泡5～8min，用无菌吸水纸吸干牦牛曲拉表面水分；

步骤四，预培养：将冲洗过的牦牛曲拉放入其原始重量20～40倍体积的灭菌乳中，在37～40℃温度下培养至凝乳；

步骤五，乳酸菌分离：取10g预培养后的凝乳于90mL生理盐水中，按照10倍梯度稀释，取适宜稀释度的稀释液0.1mL涂布于MRS琼脂培养基37℃培养；

步骤六，乳酸菌鉴定：挑取菌落进行过氧化氢酶试验和革兰氏染色并镜检，将革兰阳性、过氧化氢酶实验阴性的纯菌菌株初步确定为乳酸菌；

步骤七，保藏：将步骤六初步确定的乳酸菌株接种于保藏培养基，然后于-80℃下保藏。