[发明专利]一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组及试剂盒

说明书

本发明涉及一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组及试剂盒，属于病毒检测技术领域。本发明提供了一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组，所述不同基因型猪圆环病毒包括猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型和猪圆环病毒4型，所述引物探针组的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.9所示。本发明所述引物探针组能够快速鉴别PCV相关病毒感染，可通过一个反应鉴别PCV2、PCV3和PCV4，具有重要的临床使用价值。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组及试剂盒。

背景技术

猪圆环病毒(PCV)是一种基因组为环状、单链的DNA病毒，根据基因组特征，目前已发现PCV1、PCV2、PCV3和PCV4四种基因型。其中，PCV1可在猪群中检出，但不致病；PCV2是引起猪断奶后衰竭综合症的主要病原；PCV3是一种与母猪皮炎综合征和繁殖障碍相关的病毒；最新报道的基因型PCV4可能与呼吸道症状、肠道症状以及猪皮炎与肾病综合征相关。在生产实际中，PCV2、PCV3、PCV4的鉴别诊断具有重要的临床意义，因此，利用新型病原学检测技术，建立快速鉴别检测方法用于PCV病原快速鉴定是有效、精准防控疫情的技术关键。但目前，尚未有同时检测PCV2、PCV3和PCV4的实时荧光PCR方法报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组及试剂盒。本发明所述引物探针组能够快速鉴别PCV相关病毒感染，可通过一个反应鉴别PCV2、PCV3和PCV4，具有重要的临床使用价值。

本发明提供了一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组，所述不同基因型猪圆环病毒包括猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型和猪圆环病毒4型，检测猪圆环病毒2型的引物探针包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的PCV2上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的PCV2下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的PCV2荧光素标记探针；检测猪圆环病毒3型的引物探针包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的PCV3上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的PCV3下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的PCV3荧光素标记探针；检测猪圆环病毒4型的引物探针包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的PCV4上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的PCV4下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的PCV4荧光素标记探针；不同基因型猪圆环病毒的荧光素标记探针的荧光报告基团属于不同检测通道。

优选的是，所述荧光报告基团包括FAM、VIC、HEX、JOE、NED、TAMRA、CY3、ROX和CY5。

优选的是，所述不同基因型猪圆环病毒的荧光素标记探针的猝灭基团包括BHQ。

本发明还提供了基于上述技术方案所述引物探针组的检测不同基因型猪圆环病毒的试剂盒，所述试剂盒包括：酶混合液和含上述技术方案所述引物探针组的PCR反应液；所述酶混合液包括0.5U/μL的Taq DNA聚合酶、20mM的Tris-HCl、0.05mM的EDTA、0.05mM的DTT、体积百分含量为40％的甘油和体积百分含量为0.2％的Tween-20；所述PCR反应液包括：10μM的各上游引物、10μM的各下游引物、5μM的各探针、反应缓冲液10mM的Tris-HCl、1.5mM的dNTPs和ddH₂O。

优选的是，所述试剂盒为多重实时荧光PCR试剂盒。

优选的是，每20μL所述试剂盒的反应体系包括10μL的酶混合液、8μL的PCR反应液和2μL的待测样品。

优选的是，所述待测样品包括血清、组织、粪便和环境拭子。

优选的是，所述试剂盒的反应条件为：95℃30sec；40个循环，每个循环为95℃5sec，62℃30sec；每个循环的第二步收集荧光信号。