[发明专利]一种缺血性视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用

说明书

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种缺血性视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用。本发明公开了circRNA‑Wdr37在制备缺血性视网膜病变诊断试剂中的应用以及一种缺血性视网膜病变的诊断试剂盒。本发明通过高通量测序和定量PCR验证，发现circRNA‑Wdr37与缺血性视网膜病变发生呈现显著地相关性。本发明利用实时荧光定量PCR技术，通过检测房水中circRNA‑Wdr37的相对含量，可以用于临床缺血性视网膜病变患者的筛选，为缺血性视网膜病变的早期干预提供理论依据。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种缺血性视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用，可根据个体的circRNA-Wdr37表达水平进行人类缺血性视网膜病变的诊断及病情发展的判断。

背景技术

缺血性视网膜病变是一类常见的眼科疾病，主要由视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、分支静脉阻塞(BRVO)、高眼压性青光眼、糖尿病视网膜病变(DR)、眼缺血综合征和大动脉炎眼底病变等视网膜血管灌注不良性病变引起。表现为视网膜发生缺血后，缺血缺氧性损害导致视网膜节细胞等细胞功能损伤，视功能下降，可严重影响患者生活质量。在慢性缺血性视网膜病变早期，患者可能并没有明显的症状，直至开始出现明显视力下降或视野缺损时，方才检查出相关缺血性眼病，但此时的视力损害已不可逆。目前，针对缺血性视网膜病变的治疗方式主要包括针对原发病的药物、激光和手术等，这些对症治疗方式主要针对晚期病程，很难逆转视神经退变和视力下降。因此亟待对缺血性视网膜病变的发生进行早期诊断和预后评估，寻找出新型创伤性小、操作性强和灵敏度高的生物标志物。

环状RNA(circular RNA,circRNA)是区别于传统线性RNA的一类新型非编码RNA分子，具有闭合环状结构，大量存在于真核转录组中。circRNA具有保守型、稳定性和特异性的特征，可以在多个层面(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达。circRNA在基因表达调控过程中起重要作用，参与多种生理及病理过程，与肿瘤、免疫、心血管疾病和神经系统疾病等密切相关，有望成为新型的疾病诊断生物标志物。

CircRNA-Wdr37是Wdr37(WD repeat domain 37)基因环化产生的非编码RNA。目前，尚无circRNA-Wdr37作为缺血性视网膜病变诊断的生物学标记物的报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种缺血性视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明提供了circRNA-Wdr37的新的用途，可作为诊断试剂用于缺血性视网膜病变的早期诊断。

本发明是这样实现的，一种基于实时荧光定量PCR技术检测缺血性视网膜病变的生物标记物，所述标记物为circRNA-Wdr37，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述标记物的检测引物如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

一种缺血性视网膜病变实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括SYBR Premix Ex Taq 2×(包括Ex Taq酶，dNTP Mixture，Mg2+，Tli RNaseH，TB Green)100μL，circRNA-Wdr37特异性的qRT-PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管，circRNA-Wdr37特异性的qRT-PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管，GAPDH定量PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管，GAPDH定量PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管。

进一步地，所述circRNA-Wdr37特异性的qRT-PCR上游引物如SEQ ID NO:4所示，下游引物如SEQ ID NO:5所示；GAPDH定量PCR上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ ID NO:3所示。