[发明专利]重症免疫缺陷猪源重组细胞及其制备方法和试剂盒有效
| 申请号： | 202010919735.X | 申请日： | 2020-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN112522309B | 公开（公告）日： | 2023-10-13 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;马翔;曾为俊;王磊;程锐;赵泽英 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 何叶喧 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重症 免疫 缺陷 重组 细胞 及其 制备 方法 试剂盒 | ||
1.一种试剂盒，包括sgRNA组合或质粒组合；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)：(a)制备重组细胞；(b)制备免疫缺陷动物模型。
所述sgRNA组合，由sgRNAIL2RG-g7、sgRNARAG1-g4和sgRNARAG2-g2组成；
所述质粒组合，由质粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)、质粒pKG-U6gRNA(RAG1-g4)和质粒pKG-U6gRNA(RAG2-g2)组成；
所述质粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)转录得到sgRNAIL2RG-g7；
所述质粒pKG-U6gRNA(RAG1-g4)转录得到sgRNARAG1-g4；
所述质粒pKG-U6gRNA(RAG2-g2)转录得到sgRNARAG2-g2；
所述sgRNAIL2RG-g7的靶序列结合区如SEQ ID NO：24中第1-20位核苷酸所示；
所述sgRNARAG1-g4的靶序列结合区如SEQ ID NO：9中第1-20位核苷酸所示；
所述sgRNARAG2-g2的靶序列结合区如SEQ ID NO：13中第1-20位核苷酸所示。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括质粒pKG-GE3；
质粒pKG-GE3中，具有特异融合基因；所述特异融合基因编码特异融合蛋白；
所述特异融合蛋白自N端至C端依次包括如下元件：两个核定位信号、Cas9蛋白、两个核定位信号、自剪切多肽P2A、荧光报告蛋白、自裂解多肽T2A、抗性筛选标记蛋白；
质粒pKG-GE3中，由EF1a启动子启动所述特异融合基因的表达；
质粒pKG-GE3中，所述特异融合基因下游具有WPRE序列元件、3’LTR序列元件和bGHpoly(A)signal序列元件。
3.sgRNA组合，由sgRNAIL2RG-g7、sgRNARAG1-g4和sgRNARAG2-g2组成；
所述sgRNAIL2RG-g7的靶序列结合区如SEQ ID NO：24中第1-20位核苷酸所示；
所述sgRNARAG1-g4的靶序列结合区如SEQ ID NO：9中第1-20位核苷酸所示；
所述sgRNARAG2-g2的靶序列结合区如SEQ ID NO：13中第1-20位核苷酸所示。
4.质粒组合，由质粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)、质粒pKG-U6gRNA(RAG1-g4)和质粒pKG-U6gRNA(RAG2-g2)组成；
所述质粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)转录得到sgRNAIL2RG-g7；
所述质粒pKG-U6gRNA(RAG1-g4)转录得到sgRNARAG1-g4；
所述质粒pKG-U6gRNA(RAG2-g2)转录得到sgRNARAG2-g2；
所述sgRNAIL2RG-g7的靶序列结合区如SEQ ID NO：24中第1-20位核苷酸所示；
所述sgRNARAG1-g4的靶序列结合区如SEQ ID NO：9中第1-20位核苷酸所示；
所述sgRNARAG2-g2的靶序列结合区如SEQ ID NO：13中第1-20位核苷酸所示。
5.权利要求3所述sgRNA组合或权利要求4所述质粒组合或权利要求1所述试剂盒或权利要求2所述试剂盒的应用，为如下(a)或(b)：(a)制备重组细胞；(b)制备免疫缺陷动物模型。
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