[发明专利]一种基于多次进样进行色谱柱上富集的分析方法

说明书

本发明提供了一种基于多次进样进行色谱柱上富集的分析方法，通过分次进样在色谱柱上进行样品富集，消除或降低因样品溶剂不匹配色谱流动相而造成的色谱柱过载，可以用于简化样品制备，提高低含量待检物信号的信噪比并且改善其检测灵敏度，并可以辅助解决常规制样方法中富集微量不稳定或易挥发被检物的难题。

技术领域

本发明涉及化学成份分析领域，具体涉及一种基于多次进样进行色谱柱上富集的分析方法。

背景技术

基于HPLC和LC-MS的检测分析在生命科学、产品质量控制、体育公平竞争等领域起着至关重要的作用。一般说来，其样品制备的主要步骤包括选择适当溶剂进行液相/液相或液相/固相萃取,达到富集目标物和去除杂质的目的。如果所用萃取工作介质与液相色谱流动相不匹配，或萃取液中待检物质浓度过低，则需要进一步处理。否则在色谱分析过程中，前者容易造成色谱柱过载而影响分离效果，后者会使检测达不到要求。由于被检物质往往在物理性质、化学性质等方面差别巨大，特别是在未知其属性的情况下，有时很难找出合适的样品处理方案。例如，常规解决上述问题的方法是利用氮吹、加热或减压蒸发等方法去除萃取介质，之后将目标检测物重新溶解于合适的溶剂中。此步骤费工费时，且容易造成待检物质的损失、异构、或分解，引起偏差；对于易挥发的待检物，则无法使用此方法。

因此在实际检测过程中，分析人员往往采用减少进样体积或使用大柱载量色谱柱的对策，对萃取介质中的待检物进行直接检测。但是这种做法常常伴随着因进样量不足而导致的检测达不到要求的情况，更不能解决待检物质浓度过低的问题。

发明内容

本发明的目的是解决上述的不足，提供一种基于多次进样进行色谱柱上富集的分析方法。

为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：一种基于多次进样进行色谱柱上富集的分析方法，对于反相色谱，包括如下步骤：

步骤1，首先液相采用比正常分析所用流动相更高的水相比例进行柱平衡，柱平衡的过程中使用到的流动相包括A液和B液，A液所占的比例为0％-95％，余量为B液；

步骤2，液相采用比正常分析所用流动相更高的水相比例，进行多次进样，在色谱柱上富集待检物；

步骤3，在恢复正常溶剂比例后进行样品分析。

进一步的，所述A液为含有或不含有缓冲试剂的有机溶剂或水/有机混合溶剂，所述B液为含有或不含有缓冲试剂的水溶剂或水/有机混合溶剂。

进一步的，所述步骤2中进样的次数为2-500次。

进一步的，所述方法用于检测低浓度植物源性花青素时，色谱条件为：使用Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7um 3.0x 150mm色谱柱，柱温为35℃，进样10次，每次进样量为2.0ul，梯度洗脱条件为0.00min-44.00min，A液在流动相中的比例为从0.00％增加至90.00％，再降低至0.00％，B液在流动相中的比例为从100.00％降低至10.00％，再增加至100.00％，流速为0.300ml/min-1.200ml/min，所述A液为100％乙腈，所述B液为1.00％甲酸水溶液。

进一步的，所述方法用于分析石斛萃取稀释液中的N-isopentenyl dendrobinium时，色谱条件为：使用Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7um 3.0x 150mm色谱柱，柱温为35℃，进样10次，每次进样量为3.0ul，梯度洗脱条件为0.00min-98.00min，A液在流动相中的比例为从0.00％增加至95.00％，再降低至0.00％，B液在流动相中的比例为从100.00％降低至5.00％，再增加至100.00％，流速为0.600ml/min-1.000ml/min，所述A液为100％乙腈，所述B液为0.100％甲酸水溶液。