[发明专利]基于柠檬酸铁铵的制备生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡模型的方法及制备抗肿瘤药物的应用

说明书

本发明涉及基于柠檬酸铁铵的制备生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡模型的方法及制备抗肿瘤药物的应用，属于抗肿瘤药物技术领域。本发明提供了基于柠檬酸铁铵的制备生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡模型的方法，包括以下步骤：当培养的肿瘤细胞密度达到65～75％时，加入柠檬酸铁铵，继续培养20～30h，得到铁死亡模型。柠檬酸铁铵处理生殖泌尿系统肿瘤细胞，是一种给非常简便、高效的铁死亡肿瘤细胞模型制备方法，并且柠檬酸铁铵表现的抗肿瘤活性为后续研发和临床治疗提供了理论依据。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物技术领域，具体涉及基于柠檬酸铁铵的制备生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡模型的方法及制备抗肿瘤药物的应用。

背景技术

泌尿生殖系统肿瘤严重危害人类的生命健康，现有的放化疗和手术治疗效果并不理想。近年来生殖泌尿系统肿瘤的发病呈现逐年快速增长趋势，尤其以乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和肾癌为主。通常，大多数生殖泌尿系统肿瘤早期并没有很多躯体症状，一旦发现，已经进入了中晚期。目前，很多化疗药物的毒副作用较大，在杀伤肿瘤细胞的同时，对机体正常细胞也造成了很大的伤害。因此，亟待研发一些针对泌尿生殖系统肿瘤的广谱、高效、低毒、相对安全并且廉价的生化药物。铁死亡(Ferroptosis)是一种铁依赖性的，区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式。铁死亡的主要机制是，在二价铁或酯氧合酶的作用下，催化细胞膜上高表达的不饱和脂肪酸，发生脂质体过氧化，从而诱导细胞死亡；此外，还表现在GPX4抗氧化体系(脂质过氧化物)表达量的降低。GPX4酶是唯一一个用于脂质体过氧化物的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)。GPX4可以使脂质过氧化的过氧键转变为羟基，失去其过氧化物的活性。研究发现，当向细胞内持续输入铁离子，并保证铁离子以二价铁的形式存在，当达到铁过载状态的时候，便可启动脂质体过氧化。过氧化脂质体可以显著消耗体内GPX4的活性，诱发铁死亡。当细胞发生铁死亡时，细胞线粒体变小，膜密度增高，嵴减少，同时伴有细胞浆内脂质过氧化增高和ROS升高。研发导致生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡的药物，对于实现其临床治疗是非常有意义的，但目前的含Fe²⁺药物毒性大，这些药物的用量在不同的细胞上呈现出很大的差异，故用这些药物构建模型的稳定性并不高。

发明内容

本发明的目的在于提供基于柠檬酸铁铵的制备生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡模型的方法及制备抗肿瘤药物的应用。柠檬酸铁铵处理生殖泌尿系统肿瘤细胞，无毒性，且稳定性高，至少在生殖泌尿系统肿瘤的4株常用细胞系中，同一个浓度都会产生铁死亡的效果，是一种给非常简便、高效的铁死亡肿瘤细胞模型制备方法，并且柠檬酸铁铵表现的抗肿瘤活性为后续研发和临床治疗提供了理论依据。

本发明提供了基于柠檬酸铁铵的制备生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡模型的方法，包括以下步骤：当培养的肿瘤细胞密度达到65～75％时，加入柠檬酸铁铵，继续培养20～30h，得到铁死亡模型。

本发明还提供了柠檬酸铁铵在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明还提供了柠檬酸铁铵在制备抗生殖泌尿系统肿瘤药物中的应用。

本发明还提供了柠檬酸铁铵在制备抑制生殖泌尿系统肿瘤细胞增殖的药物中的应用。

本发明还提供了柠檬酸铁铵在制备提高生殖泌尿系统肿瘤细胞中Fe²⁺浓度的药物中的应用。

本发明还提供了柠檬酸铁铵在制备促进生殖泌尿系统肿瘤细胞发生氧化应激损伤的药物中的应用。

本发明还提供了柠檬酸铁铵在制备靶向调控生殖泌尿系统肿瘤细胞铁死亡相关蛋白表达的药物中的应用，所述铁死亡相关蛋白包括铁死亡负性调控因子和铁死亡相关激活因子；所述铁死亡负性调控因子包括细胞增殖相关蛋白Ki67、铁死亡抑制因子GPX4和铁死亡抑制因子FTH1；所述铁死亡相关激活因子包括铁死亡促进因子RPL8和铁死亡促进因子NOX1。