[发明专利]TNFR2基因人源化的非人动物的构建方法和应用

权利要求书

1.一种TNFR2基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述非人动物体内表达人或人源化TNFR2蛋白，同时内源TNFR2蛋白表达降低或缺失，所述的构建方法包括将包含SEQ ID NO：7的核苷酸序列替换非人动物TNFR2基因座的2号外显子的部分序列至6号外显子的部分序列，所述人源化TNFR2蛋白如SEQ ID NO：9所示氨基酸序列，所述的非人动物为小鼠。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人或人源化TNFR2蛋白结合靶向人特定抗原的抗体。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述的非人动物的基因组中包含人或人源化TNFR2基因，其中，所述的人源化TNFR2基因包括SEQ ID NO：7。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的人或人源化TNFR2基因通过内源调控元件调控。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括将包含编码SEQID NO：4第33-259位的核苷酸序列替换至非人动物TNFR2基因座。

6.根据权利要求1-2和4-5任一所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括使用靶向载体进行非人动物的构建，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：7。

7.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化TNFR2基因转录的mRNA序列为SEQ ID NO：8所示的序列。

8.一种TNFR2基因的靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体包含SEQ ID NO：7所示的序列，所述的靶向载体还包含5’臂和3’臂，其中，所述5’臂包含SEQ ID NO：5，所述的3’臂包含SEQ ID NO：6。

9.一种制备多基因人源化的非人动物或其子代的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采用权利要求1-7任一所述的构建方法制备的非人动物；

（2）将步骤（1）制备获得的非人动物与其他人源化动物交配、体外授精或直接进行基因编辑，并进行筛选，得到多基因人源化的非人动物或其子代。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的其他人源化动物包括基因PD-1、PD-L1、CTLA4、LAG3、TIM3、CD27、CD28、CD40、CD47、CD73、SIRPA、OX-40、4-1BB、GITR或TIGIT基因人源化动物。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述的非人动物为小鼠。

12.一种人源化TNFR2蛋白，其特征在于，所述的人源化TNFR2蛋白为SEQ ID NO：9所述的氨基酸序列。

13.一种编码权利要求12所述人源化TNFR2蛋白的人源化TNFR2基因。

14.根据权利要求13所述的人源化TNFR2基因，其特征在于，所述的人源化TNFR2基因包括SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列。

15.一种包含TNFR2基因人源化改造的细胞、组织或者器官，所述的细胞、组织或者器官来源于权利要求1-7任一所述的构建方法获得的非人动物，所述的细胞、组织或者器官表达权利要求12所述人源化TNFR2蛋白，或者，所述的细胞、组织或者器官包含权利要求13-14任一所述的人源化TNFR2基因，其中，所述的细胞、组织或者器官不能发育为动物个体。