[发明专利]一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法

权利要求书

1.一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）随机选取若干尾斑马鱼，加入待测试样，UVB照射，建立试样组；

（2）随机选取与步骤（1）中数目相同的斑马鱼，UVB照射，建立模型对照组；

（3）分别采集试样组和模型对照组中斑马鱼的尾鳍照片，分析尾鳍面积A，按照以下公式评价皮肤损伤修复功效：

；

（4）分别采集试样组和模型对照组中的斑马鱼，用生理盐水制备成匀浆液，测定所述匀浆液的糖化血红蛋白OD值，根据糖化血红蛋白OD值换算糖化血红蛋白含量H，按照以下公式评价抗糖基化功效：

；

（5）分别将试样组和模型对照组中的斑马鱼用4%多聚甲醛固定过夜，用β-半乳糖苷酶染色试剂盒进行染色，测定斑马鱼β-半乳糖苷酶染色强度S，按照以下公式评价β半乳糖苷酶抑制功效：

；

（6）分别将试样组和模型对照组中的斑马鱼用CellROX®避光染色，测定斑马鱼卵黄囊荧光强度F，按照以下公式评价抗氧化功效：

；

（7）分别测定试样组和模型对照组中斑马鱼20 min内的总运动距离L，按照以下公式评价运动改善功效：

；

所述步骤（1）和（2）中，UVB照射的条件为：照射强度为9 mW/cm²；照射10~20 min/次，共3~5次，间隔30 min；

步骤（1）中，所述待测试样为化妆品，所述斑马鱼为受精后2天的斑马鱼；或

步骤（1）中，所述待测试样为保健食品，所述斑马鱼为受精后3天的斑马鱼。

2.根据权利要求1所述的一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述匀浆液的糖化血红蛋白OD值的测定方法为：将所述匀浆液离心取上清液，加入到包被了HbA1c抗体的微孔板中，再加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100 μL，37℃避光孵育1h；洗涤后，分别加入底物A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min；每孔加入终止液50 μL，15 min内在450 nm处检测OD值，做标准曲线，测定所述匀浆液的糖化血红蛋白OD值。

3.根据权利要求1所述的一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法，其特征在于，步骤（5）中，所述β-半乳糖苷酶染色强度S的测定方法为：将斑马鱼用PBS清洗3遍，4%多剧甲醛4℃固定过夜；用PBS洗3遍，弃PBS，加入β-半乳糖苷酶染色工作液1 mL，37℃避光孵育过夜；用PBS洗1遍，在解剖显微镜下拍照。

4.根据权利要求1所述的一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述卵黄囊荧光强度F的测定方法为：将斑马鱼用PBS洗脱2遍，70rpm，洗脱结束，用终浓度为10 μM的CellROX®避光28℃染色0.5小时；染色结束，再用PBS洗脱2遍，70 rpm，避光，在荧光显微镜下拍照。

5.根据权利要求1所述的一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法，其特征在于，步骤（7）中，所述总运动距离L的测定方法为：将斑马鱼从6孔板转移至96孔板，每孔1尾鱼，定容200 μL，采用行为分析仪检测黑暗环境下20 min内的总运动距离。

6.根据权利要求1所述的一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法，其特征在于，步骤（3）~（7）中，两组间用T检验，多组间用ANOVA分析，以P  0.05为差异有显著性。

7.根据权利要求1-6任一所述的一种评价化妆品和保健食品抗光老化、糖基化功效的方法，其特征在于，步骤（1）~（7）中，所述斑马鱼为野生型AB品系斑马鱼。