[发明专利]一种蛋白-A抗原的制备工艺

权利要求书

1.一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：包括以下步骤：

S1、挑选公兔，并将挑选的公兔进行隔离饲养；

S2、从冰箱中取出一管含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物,解冻后用保温瓶送到无菌室用于接种睾丸；

S3、在公兔每侧睾丸各注射含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物；

S4、对注射后的公兔每天观察两次；

S5、将公兔用CO₂处死，送入无菌室采取睾丸；

S6、将采集到的睾丸冲洗后放入冰箱中冻结保存；

S7、捣碎后得含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物粗品放入冰箱中冻结保存；

S8、将病毒从破裂的细胞中分解出来；

S9、完成三次冻溶的含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物粗品放入冰箱中冻结保存，完成蛋白-A抗原的制备。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S1

a、选用体重超过2.5kg的健康公兔；

b、将挑选的每一只公兔都隔离饲养。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S2

a、从-80℃冰箱中取出一管15ml含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物；

b、解冻后用保温瓶送到无菌室用于接种睾丸。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S3

a、在无菌室的外清间，把公兔固定在固定板上从传递窗送入无菌室； b、在工作台上用70%酒精消毒公兔两侧睾丸；

c、用1ml一次性注射器从试管中吸取含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物；

d、在公兔每侧睾丸各注射0.2ml含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S4

a、把睾丸已接种含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物的公兔放入兔舍饲养；

b、每天观察两次，检查睾丸的颜色，肿大程度及硬度等以便决定采睾日期。

6.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S5

a、对注射含有牛痘病毒的公兔观察4-5天后，睾丸的各项指标达到要求；

b、将公兔用CO₂处死，送入无菌室采取睾丸。

7.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S6

a、采集到的睾丸先用0.85%的生理盐水冲洗一次，再用PBS(-)冲洗两次；

b、将冲洗完的睾丸放入专用的不锈钢盒中并立即放入-80℃冰箱中冻结保存。

8.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S7

a、从-80℃冰箱中把睾丸取出在室温下软化1-2小时；

b、称重后用消毒的镊子把睾丸放入捣碎机中，加入等量配制并消毒后的Eagle’s培养基保护液；

c、捣碎后得含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物粗品，将该粗品分装于100ml的输液瓶中，并立即放入-80℃冰箱中冻结保存。

9.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S8

a、把装有冻结后含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物粗品的输液瓶从-80℃冰箱中取出，放入37℃水浴箱中溶解，溶解时瓶的颈部必须露出水面；

b、待完全溶化后，将装有含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物粗品的输液瓶再次放入-80℃冰箱中冻结；

c、步骤a-b重复三次。

10.根据权利要求1所述的一种蛋白-A抗原的制备工艺,其特征在于：所述根据步骤S9

a、把完成三次冻溶的含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物粗品用低温离心机在4℃下，4000转/分钟离心20分钟得上清夜；

b、上清液含有牛痘病毒的兔睾丸组织培养物留样做无菌，效价，综合及中和试验，用作传代的装入20ml带盖试管中，用作生产的装入100ml的输液瓶中，放入-80℃冰箱中冻结保存。