[发明专利]一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用

说明书

一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用，该单克隆抗体与新冠病毒棘突糖蛋白RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；本发明的针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，效价高、特异性强，可以高效表达，能与新冠病毒SARS‑CoV‑2表面的棘突蛋白RBD区以外的区域特异性结合，用于新冠病毒的定性或定量检测，并且能够中和一定的新冠病毒毒性，减弱病毒毒性，起到预防或/和治疗新冠病毒肺炎的作用。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体说是细胞免疫学和分子生物学技术领域，更具体说是一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用。

背景技术

新冠病毒的膜蛋白主要有表面的棘突蛋白(Spike protein，S蛋白)和膜蛋白(Membrane protein，M蛋白)，S蛋白是一种糖蛋白，主要作用于细胞粘附和细胞膜融合，在许多哺乳动物体内，S蛋白被弗林蛋白酶或其他酶分解为S1和S2，其中S1上有受体附着位点，S2主要体现融合活性。新型冠状病毒可以结合多种细胞受体，其中血管紧张素转换酶2(ACE2)作为一种肽酶是细胞表面冠状病毒的受体之一。S1内有一部分区域与ACE2紧密结合，我们称之为受体结合域(RBD)，是病毒和受体相互作用的关键因素。研究表明RBD只需更改几个氨基酸，就可能出现跨物种感染，且RBD包含重要的病毒中和表位，对提高免疫应答十分关键。

棘突蛋白承担病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合功能，是宿主中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。SARS-CoV-2(2019-nCoV)的棘突蛋白与人ACE2相互作用来感染人的呼吸道上皮细胞。

抗体是哺乳动物免疫系统中的一个重要糖蛋白分子。抗体分子由两条重链(Heavychain)和两条轻链(Light chain)组成，其中重链又分为可变区(Variable region ofheavy chain，VH)和三个恒定区(Constant region of heavy chain；CH1，CH2，CH3)，轻链则由一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)组成。可变区具有跟抗原结合的功能，因抗体个体不同而不同，而抗体的恒定区则因抗体的种属及亚型不同而不同。抗体重链可变区包含三个互补决定区(Complementarity-determining regions；CDRH1，CDRH2，CDRH3)，轻链可变区也包含三个互补决定区，即CDRL1，CDRL2，和CDRL3，互补决定区又称为高变区，直接与抗原的表位结合。

目前在新冠肺炎的治疗中并没有有效的药物，采用常规抗生素药物治疗效果并不明显，有些还存在严重的毒副作用。另一方面，由于抗体药物在传染病、自身免疫疾病的治疗上发挥着重要作用，针对性更强，因此开发针对新冠病毒的单克隆抗体具有非常重要的意义。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

本发明公开了一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，该单克隆抗体与新冠病毒SARS-CoV-2棘突糖蛋白非RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列依次为SEQID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。

优选的，一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，命名为A4，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：1，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：5。