[发明专利]一种HPLC法测定马来酸桂哌齐特中间体中氯乙酸残留检测方法

说明书

本发明属于氯乙酸检测技术领域，尤其涉及一种HPLC法测定马来酸桂哌齐特中间体中氯乙酸残留检测方法，包括如下步骤：(1)对照品溶液的配制；(2)样品溶液的配制；(3)在HPLC中进样检测；色谱检测条件为：色谱柱：硅烷键合硅胶柱为固定相的高效液相色谱柱，流动相A：水‑甲醇‑三氟乙酸，体积比为96:4:0.1，流动相B：甲醇，流动相流速：0.6‑1ml/min，色谱柱柱温：33‑37℃，进样量为20μl，检测波长：212‑216nm；(4)氯乙酸含量的计算：按外标法以峰面积计算氯乙酸的含量。本发明的有益效果是：实现使用HPLC方法对氯乙酸进行检测，操作简单，并克服了现有技术的难题。

技术领域

本发明属于氯乙酸检测技术领域，尤其涉及一种HPLC法测定马来酸桂哌齐特中间体中氯乙酸残留检测方法。

背景技术

马来酸桂哌齐特化学名为：(E)-1-{4-[(3',4',5'-三甲氧基肉桂酰基)]1-1哌嗪}乙酰吡咯啶顺丁烯二酸盐，可用于治疗脑血管疾病、心血管疾病，其常含有杂质氯乙酸，氯乙酸属于基因毒性杂质中的一种。基因毒性杂质是指能直接或者间接损害DNA，导致基因突变或具有致癌倾向的位置。氯乙酸是马来酸桂哌齐特中间体合成过程中使用到的原料之一，本发明通过严格控制氯乙酸在马来酸桂哌齐特中间体中的含量，来进一步保证药物的安全性。

近年来，EMEA、FDA、ICH等相继发布了针对基因毒性杂质的指导原则。基因毒性杂质限度要求很低，其分析检测的难度较大。高效液相色谱法是药物分子中最常用的分离分析手段，但是对于氯乙酸这种紫外吸收很弱的杂质，其检测灵敏度较低。对于含N的卤代烃，通常采用液质联用技术进行测定，但其流动相不能含有非挥发性的缓冲盐，以及TFA、三乙胺等试剂。衍生化法也常用于卤代烃的检测，但其操作较为繁琐。

中国专利CN 110988151A在背景技术中指出，由于氯乙酸的沸点低、分子量小、紫外吸收弱且含碳氢比例少，很难用常用的检测方法GC-FID、HPLC-UV、GC-MS检测试样中氯乙酸低浓度限量。因此提供了一种应用超高效液相色谱-串联质谱检测氯乙酸的方法，包括如下步骤：步骤(1)，取待测样品置于容量瓶中，加入乙腈-水1:1～9:1定容到10～50ml，涡旋混合5～15min，超声提取5～15min，过0.22μm滤膜，进样对样品中氯乙酸进行检测；步骤(2)，采用超高效液相色谱-串联质谱联用仪UPLC-MS/MS作为检测仪器对氯乙酸进行检测。该技术通过使用UPLC-MS/MS能够简单、快捷高效的对药品原料药、农用化学品及食品中氯乙酸进行定性和定量检测。但是，该检测方法对仪器要求高，需要液相色谱与质谱联用，操作过程繁琐复杂。

本发明通过对样品进行前处理，利用HPLC法即可完成低浓度氯乙酸的检测，突破了现有技术不能用HPLC检测药物中氯乙酸含量的难题。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种HPLC测定氯乙酸残留的检测方法，该方法通过对待测样品进行良溶剂的溶解和不良溶剂的沉淀析出实现氯乙酸的提取，进而实现使用HPLC方法对氯乙酸进行检测，操作简单，并克服了现有技术的难题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种HPLC法测定马来酸桂哌齐特中间体中氯乙酸残留检测方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)氯乙酸对照品溶液的配制：取氯乙酸对照品适量，精密称定，加水稀释至浓度为5μg/ml；

(2)样品溶液的配制：精密称定样品，加入乙腈使其完全溶解，配制200mg/ml的样品溶液，加水稀释至样品浓度为80mg/ml，使样品析出，涡旋离心取上清液；

(3)样品检测：将步骤(1)和(2)得到的溶液在HPLC中进样检测；